Efeito das diferentes concentrações de GDF-9 no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais na espécie equina

• Main Author: Polyana Carolina Marino
• Other Authors: Marcelo Marcondes Seneda .
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. 2015
• Online Access: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000201887

Devido ao interesse por parte dos criadores de cavalos no desenvolvimento de novas biotecnologias voltadas à reprodução equina, estudos estão sendo realizados em fêmeas afim de avaliar os folículos ovarianos pré-antrais por meio da biotécnica de MIOFOPA. Com o objetivo de avaliar o efeito das diferentes concentrações de GDF-9 no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais na espécie equina, foram utilizados ovários de éguas provenientes de abatedouro local (n=5) em anestro estacional. Os tecidos ovarianos foram seccionados sob condições assépticas em nove fragmentos de cada dos cinco animais (total= 45 fragmentos) sendo cada um deles fixados imediatamente em Bouin para controle não cultivado do experimento. Os outros fragmentos foram destinados ao cultivo in vitro em duas placas de 24 poços contendo meio base (MEM) mais a adição de diferentes concentrações de GDF-9 (50 ng/ml, 100 ng/ml e 200 ng/ml) em estufa a 39ºC em atmosfera a 5% de CO2 em ar por um período de dois e seis dias. Após o cultivo os fragmentos foram fixados em bouin por 24 horas e mantidos em álcool 70% até o processamento histológico. A avaliação morfológica dos folículos pré-antrais foi realizada por meio de histologia clássica. Dos 445 folículos classificados, 49% (220/445) eram folículos primordiais, 51% (225/445) encontravam-se em desenvolvimento e 60% (266/445) apresentavam-se morfologicamente normais (p<0,05). Os folículos cultivados in vitro na concentração de 200 ng/ml foi superior (63%) quando comparado as outras concentrações de GDF-9 após dois dias de cultivo (p<0,05) e os folículos que estavam em desenvolvimento cultivados até seis dias nas diferentes concentrações de GDF-9 50, 100 e 200 ng/ml (63,6%, 77,3% e 87,5% respectivamente), apresentaram desenvolvimento similar ao grupo controle MEM D6 (81,6%) (p>0,05). Em conclusão, o GDF-9 na concentração de 200 ng/ml por um período de dois dias de cultivo promove o desenvolvimento folicular, podendo ser utilizado no cultivo in vitro de folículos ovarianos pré-antrais na espécie equina por até dois dias de cultivo, mas não obteve bons resultados com 6 dias de cultivo. === Due to the interest of horse breeders at developing new biotechnologies aiming the equine reproduction, studies are being conducted on females in order to assess the pre-antral follicles by biotech MIOFOPA. Aiming to evaluate the effect of different concentrations of GDF-9 in vitro pre-antral follicles’ culture in the equine specie, seasonal anoestrus mares’ ovaries from a local slaughterhouse were used (n = 5). Ovarian tissues were cut under aseptic conditions into nine fragments of five animals each (total = 45 fragments) each one being immediately fixed in Bouin, as not cultivated experiment control. Other fragments were used to in vitro culture in two 24-well plates containing basal medium (MEM) plus the addition of different concentrations of GDF-9 (50 ng / ml, 100 ng / ml and 200 ng / mL) in an oven at atmosphere of 39 ° C in 5% CO2 air for a period of two to six days. After the cultivation the fragments were fixed in Bouin solution for 24 hours and kept in 70% alcohol until histological processing. Morphological assessment of pre-antral follicles was performed by histology. Of 445 follicles classified 49% (220/445) were primordial follicles, 51% (225/445) were in development and 60% (266/445) seem to be morphologically normal (p <0.05). The follicles cultured in vitro at a concentration of 200 ng / ml were higher (63%) when compared to other concentrations of GDF-9 after two days of cultivation (p <0.05) and follicles that were in development culture up to six days in different concentrations of GDF-9 50, 100 and 200 ng / ml (63.6%, 77.3% and 87.5% respectively), presented similar development to the control group MEM D6 (81.6%) (P> 0.05). In conclusion, the GDF-9 at 200 ng / mL concentration for a period of two days of cultivation promotes promoting follicular development, and presenting high chance of being used in vitro cultivation of preantral follicles in the equine specie for up to two days of culture, but did not presented good results with at the six days cultivation.