Obtención de extractos de membrana externa de Vibrio cholerae O1, mediante el uso de diferentes detergentes

• Main Authors: José Luis Pérez, Yamisley González, Gemma Año, Bárbara Cedré, Tania Valmaseda, Maydelis Alvarez, Daily Serrano, Ernesto Millián, Mildrey Fariñas, Arturo Talavera, Luis García
• Format: Article
• Language: English
• Published: Finlay Ediciones 2006-04-01
• Series: VacciMonitor
• Subjects: Cólera; vacunas; respuesta vibriocida; complejos PME-LPS
• Online Access: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-028X2006000100001&lng=es&nrm=iso&tlng=es
• ISSN: 1025-028X; 1025-0298

En la actualidad existen dos variantes principales de vacunas orales contra el cólera: una basada en células inactivadas de diferentes biotipos y serotipos y otra basada en la administración de cepas vivas genéticamente atenuadas. Una vacuna por subunidades pudiera ser una variante muy atractiva. Este trabajo describe la purificación parcial y caracterización preliminar de extractos de proteínas de membrana externa-lipopolisacárido (PME-LPS), obtenidos a partir de Vibrio cholerae O1, con el interés de seleccionar un proteoliposoma que posteriormente será estructurado en forma de cocleatos para su uso por vía oral en humanos. Las preparaciones fueron obtenidas a través del uso de diferentes detergentes. La cantidad de LPS en cada preparación fue estimada mediante la determinación de las unidades endotóxicas en el ensayo del Limulus (LAL). La composición de cada muestra fue evaluada mediante SDS-PAGE y Dot Blot. La inoculación intranasal (IN) en ratones Balb/c se utilizó para la evaluación de la inmunogenicidad de las preparaciones, y la respuesta inmune fue determinada por ELISA y el título de anticuerpos vibriocidas. El tamaño molecular de la preparación con mejores resultados en inmunogenicidad se estimó mediante la cromatografía en Sephacryl S-1000. Se obtuvieron diferentes perfiles electroforéticos de acuerdo con el tipo de detergente utilizado. El LPS fue identificado en todas las preparaciones y aquella obtenida con el SDS al 15% mostró la más baja relación proteínas/LPS y los mejores resultados en los ensayos de inmunogenicidad. Adicionalmente se comprobó que su tamaño molecular es similar al observado en el proteoliposoma de VAMENGOC- BC. La preparación obtenida con el SDS al 15% constituye un proteoliposoma, con capacidad para estimular altos niveles de anticuerpos IgG anti-LPS y altos títulos de anticuerpos vibriocidas, luego de su administración por vía intranasal en ratones. Estos resultados constituyen un importante paso en las investigaciones dirigidas a la obtención de una vacuna por subunidades, como alternativa preventiva contra el cólera.