Aplicación de metodos bioquímicos en la caracterización de antígenos vacunales, alergenos y otras biomoleculas de origen bacteriano.

• Main Authors: Ileana Martínez, María A Padrón, Michel Acosta, Rubén Cabrera, Yamisley González, Miguel Martínez, Yovania Fernández, Marta González, Luís García, Yadira Pino, Osmir Cabrera, Maribel Cuello, José L Pérez, Alina Frías, Idalis Griñán, Sara C Ernard, G Reyes, María C Pico, Arlen L de Arce
• Format: Article
• Language: English
• Published: Centro Nacional de Investigaciones Científicas 2005-01-01
• Series: Revista CENIC. Ciencias Biológicas
• Online Access: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=181220525052

Desde las etapas iniciales de la investigación y desarrollo de los productos biotecnológicos es importante la aplicación de las guías de recomendaciones elaboradas por las Organizaciones Reguladoras para la Industria, en lo relacionado con la validación de los métodos analíticos que demuestren la identidad, fortaleza, calidad y pureza de estos productos. En este trabajo se estandarizaron algunos métodos físico- químicos e inmunoquímicos de menor complejidad para su aplicación en la caracterización de biomoléculas con potencialidades antigénicas, alergénicas y algunas de uso como fungicidas. Materiales y métodos. a) Cromatográficos: Cromatografía en Superosa 12, Sephacryl S-100, Sephacryl S-1000, Sepharosa CL-4B, para la determinación del tamaño de distribuciones de proteínas de membrana externa (PME) procedentes de Vibrio cholerae, Pseudomona, Shigella, Leptospira ssp , así como para la caracterización molecular de los principios activos utilizados en conjugados vacunales. Cromatografía en capa fina (TLC) para la separación de principios activos cromóforos de Pseudomona y para la evaluación de carbohidratos metabólicos de interés. b) Electroforesis: en geles de poliacrilamida en un Phast System, para la identidad antigénica de las PME y para la evaluación del contenido e identidad de alergenos procedentes de Dermatophagoides siboney. c) Métodos inmunoquímicos: Dot blot, para la identidad de los antígenos utilizados en conjugados vacunales. Los métodos se clasificaron de acuerdo a las categorías de aplicación recomendadas por la OMS y se evaluaron los parámetros de validación: Especificidad, Exactitud, Precisión, Linealidad, Rango, Robustez. Resultados y Conclusiones. Los resultados fueron satisfactorios, según las referencias para estos tipos de métodos, lo que garantiza la seguridad y confiabilidad en la caracterización de las biomoléculas con múltiples usos.