Identification and properties of two extracellular proteases from Brevundimonas diminuta Identificação e propriedades de duas proteases extracelulares de Brevundimonas diminuta

• Main Authors: André Adriano Chaia, Salvatore Giovanni-De-Simone, Simone Dias Gonçalves Petinate, Ana Paula Cabral de Araújo Lima, Marta Helena Branquinha, Alane Beatriz Vermelho
• Format: Article
• Language: English
• Published: Sociedade Brasileira de Microbiologia 2000-03-01
• Series: Brazilian Journal of Microbiology
• Subjects: metaloproteases; Brevundimonas diminuta; Pseudomonadaceae; proteases extracelulares; metalloproteases; extracellular proteases
• Online Access: http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1517-83822000000100007
• ISSN: 1517-8382; 1678-4405

Extracellular proteases from Brevundimonas diminuta (syn. Pseudomonas diminuta) were studied in sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) containing a copolymerized substrate. Two proteases were detected migrating at 67 kDa and 50 kDa: both of them hydrolysed preferentially gelatin, but casein was also degraded and a slight hydrolysis was observed with hemoglobin. No detectable extracellular proteolytic activity was found in bovine serum albumin-containing gels. The optima temperature and pH for proteolytic activity were between 40ºC and 50ºC in a pH ranging from 7.0 to 11.0, respectively. These enzymes were isolated by analytical high performance liquid chromatography (HPLC). Protease assays with the synthetic substrate Z-Phe-Arg-MCA and the inhibitors EGTA, EDTA and 1, 10 phenanthroline point out that these enzymes are metalloproteases.<br>Proteases extracelulares de Brevundimonas diminuta (Pseudomonas diminuta) foram identificadas e caracterizadas por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato de sódio, contendo um substrato co-polimerizado. Duas proteases foram detectadas migrando em 67 kDa e 50 kDa: ambas hidrolisaram preferencialmente a gelatina, embora a caseína também tenha sido degradada e uma pequena hidrólise tenha sido observada com hemoglobina. Nenhuma atividade proteolítica extracelular foi detectada nos géis contendo soro albumina bovina. Condições ótimas de temperatura e pH para a atividade proteolítica foram observadas entre 40ºC e 50ºC e numa faixa de pH que variou de 7,0 a 11,0, respectivamente. Essas enzimas foram isoladas por cromatografia líquida de alta resolução. Os ensaios enzimáticos com o substrato sintético Z-Phe-Arg-MCA e com os inibidores EGTA, EDTA e 1, 10 fenantrolina indicam que essas enzimas são metaloproteases.