Detección de proteínas de adhesión a fibronectina y colágeno presentes en Leptospira interrogans serovar Canicola
Como parte de los estudios encaminados a la obtención de una formulación vacunal por subunidades contra la leptospirosis humana, se describe la purificación y caracterización de las proteínas de unión a fibronectina y a colágeno en Leptospira interrogans. Las proteínas de la membrana externa fueron...
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Finlay Ediciones
2007-12-01
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Series: | VacciMonitor |
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doaj-3a1068f15c16423cb6e250e6b067c2a22020-11-25T00:47:38ZengFinlay EdicionesVacciMonitor1025-028X1025-02982007-12-0116316Detección de proteínas de adhesión a fibronectina y colágeno presentes en Leptospira interrogans serovar CanicolaGisele Reyes0Reinier Borrero 1Aniel Moya2María de los Angeles Padrón3Michel Acosta4Rubén Cabrera5Luis García6Instituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. La Habana,CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. La Habana,CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. La Habana,CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. La Habana,CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. La Habana,CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. La Habana,CubaInstituto Finlay. Centro de Investigación-Producción de Vacunas y Sueros. La Habana,CubaComo parte de los estudios encaminados a la obtención de una formulación vacunal por subunidades contra la leptospirosis humana, se describe la purificación y caracterización de las proteínas de unión a fibronectina y a colágeno en Leptospira interrogans. Las proteínas de la membrana externa fueron extraídas mediante la solubilización con Tritón X-114 y se aplicaron en una columna de afinidad de IgG AntiBSA-Sepharose 2B CL, para eliminar la BSA, contaminante principal del medio de cultivo en que crece el microorganismo. La muestra libre de BSA (no fijado) se aplicó a una columna de afinidad de fibronectina Sepharose 4B-CNBr, que permitió la separación y detección de una fracción que contenía una proteína de unión a fibronectina presente en la cepa 87 de Leptospira interrogans serovar Canicola, cuyo peso molecular fue estimado en 40 kDa. La proteína aislada demostró ser antigénica y conservada en los serovares Canicola, Copenhageni y Mozdok, en el ensayo de inmunodetección utilizado en este estudio (Dot blot). Para ello se utilizaron sueros específicos obtenidos en ratas infectadas experimentalmente con cada serovar y una mezcla de sueros de humanos convalecientes de leptospirosis. Las proteínas de membrana externa solubilizadas con Tritón X-114, libres de BSA, fueron aplicadas también a una columna de afinidad colágeno-Sepharosa 4B-CNBr, que permitió la purificación de una proteína de unión a colágeno con un peso molecular de aproximadamente 25 kDa, la cual resultó ser antigénica frente a sueros de humanos convalecientes de la enfermedad. Ambas proteínas seleccionadas (40 kD y 25 kD) podrían ser evaluadas como posibles inmunógenos en futuros estudios encaminados a la obtención de nuevos antígenos vacunales.http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-028X2007000300001&lng=es&nrm=iso&tlng=esLeptospiracolágenofibronectinacromatografía de afinidad |
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Como parte de los estudios encaminados a la obtención de una formulación vacunal por subunidades contra la leptospirosis humana, se describe la purificación y caracterización de las proteínas de unión a fibronectina y a colágeno en Leptospira interrogans. Las proteínas de la membrana externa fueron extraídas mediante la solubilización con Tritón X-114 y se aplicaron en una columna de afinidad de IgG AntiBSA-Sepharose 2B CL, para eliminar la BSA, contaminante principal del medio de cultivo en que crece el microorganismo. La muestra libre de BSA (no fijado) se aplicó a una columna de afinidad de fibronectina Sepharose 4B-CNBr, que permitió la separación y detección de una fracción que contenía una proteína de unión a fibronectina presente en la cepa 87 de Leptospira interrogans serovar Canicola, cuyo peso molecular fue estimado en 40 kDa. La proteína aislada demostró ser antigénica y conservada en los serovares Canicola, Copenhageni y Mozdok, en el ensayo de inmunodetección utilizado en este estudio (Dot blot). Para ello se utilizaron sueros específicos obtenidos en ratas infectadas experimentalmente con cada serovar y una mezcla de sueros de humanos convalecientes de leptospirosis. Las proteínas de membrana externa solubilizadas con Tritón X-114, libres de BSA, fueron aplicadas también a una columna de afinidad colágeno-Sepharosa 4B-CNBr, que permitió la purificación de una proteína de unión a colágeno con un peso molecular de aproximadamente 25 kDa, la cual resultó ser antigénica frente a sueros de humanos convalecientes de la enfermedad. Ambas proteínas seleccionadas (40 kD y 25 kD) podrían ser evaluadas como posibles inmunógenos en futuros estudios encaminados a la obtención de nuevos antígenos vacunales. |
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