Purificación de lipopolisacárido de Neisseria meningitidis a partir de una fracción colateral del proceso de producción de VA-MENGOC-BC®

• Main Authors: Julio A. Balboa, Jorgelina Estrada, Liliam D. Nápoles, Susan Aguilar, Humberto González, Dairis Hernández, Yisabel Aranguren, Yoanna Garrido, Marlenis Cardoso, Gisela Puentes, Ramón Barberá, Gustavo Sierra.
• Format: Article
• Language: English
• Published: Finlay Ediciones 2008-04-01
• Series: VacciMonitor
• Subjects: Lipopolisácarido; lipooligosacárido; purificación; Neisseria meningitidis; vacuna antimeningocócica
• Online Access: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1025-028X2008000100003&lng=es&nrm=iso&tlng=es

El trabajo tuvo como objetivo purificar lipopolisacáridos (LPS) de Neisseria meningitidis a partir de una fracción colateral del proceso de producción de la vacuna antimeningocócica VA-MENGOC-BC®, el sobrenadante que se obtiene del paso de ultracentrifugación durante el proceso de extracción de las proteínas de membrana externa del meningococo. La purificación se realizó mediante precipitación con etanol al 80%, extracción de las proteínas con fenol al 90% entre 65-70 ºC y ultracentrifugación fraccionada a 105,000 g. Se obtuvieron tres lotes de LPS, en total 1,069 g, con un contenido de proteínas, ácidos nucleicos y ácido sálico respecto al LPS de 0,5%, 0,3% y 2,2% (m/m) respectivamente. La evaluación por cromatografía mostró una alta integridad molecular, con valores de constante de distribución reproducibles (0,36-0,38) y una posible asociación del ácido siálico al LPS. Se apreció homogeneidad en el perfil electroforético de los tres lotes y alta actividad endotóxica. El LPS purificado fue identificado fundamentalmente como del inmunotipo L3,7,9. El procedimiento de purificación empleado permite aprovechar una fracción colateral del proceso de producción de la vacuna, es escalable, no incluye métodos cromatográficos, y posibilita la obtención de gran cantidad de LPS de Neisseria meningitidis, no disponible en el mercado, con elevada pureza y alta actividad endotóxica.