Establecimiento de una reacción en cadena de la polimerasa para la detección de bacterias y hongos

• Main Author: Héctor Javier Pérez-Cano
• Format: Article
• Language: English
• Published: Permanyer 2014-04-01
• Series: Revista Mexicana de Oftalmología
• Subjects: Reacción en cadena de la polimerasa; Reacción en cadena de la polimerasa anidada; Conjuntivitis bacteriana; Queratitis bacteriana; Queratitis fúngica; Lentes de contacto
• Online Access: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0187451914000043

Los métodos de laboratorio utilizados para el diagnóstico de blefaritis, conjuntivitis y queratitis incluyen desde exámenes en fresco para búsqueda de parásitos, tinciones hasta cultivos microbiológicos que pueden durar hasta 2 semanas para obtener el resultado. Objetivo: Implementar una PCR para la detección de hongos y bacterias grampositivas y gramnegativas utilizando un método reportado previamente y adaptado a las condiciones del laboratorio de biología molecular del Centro de Investigación Biomédica de La Fundación Hospital Nuestra Señora de la Luz I.A.P. (CIB-HOL) utilizando el termociclador Axygen/Maxygene. Métodos: Se realizó una extracción de ADN de cultivos microbiológicos de bacterias grampositivas, gramnegativas y hongos. Se hicieron diluciones seriadas para determinar la sensibilidad del método. Se realizó PCR para hongos y bacterias. Se buscaron las condiciones en común para realizar la PCR en un solo paso. Resultados: Utilizando las diluciones del ADN se obtuvo producto de amplificación utilizando una cantidad de 0.12 ng de ADN bacteriano y de 0.15 ng de ADN fúngico. Conclusiones: La técnica de la PCR es una herramienta muy importante para la detección de ADN de bacterias y hongos causantes de infecciones oculares. Permite amplificar el material genético del agente etiológico y facilita su observación, obteniéndose los resultados en menor tiempo que con las técnicas convencionales.