Cuantificación de bacterias cultivables mediante el método de “Goteo en Placa por Sellado (o estampado) Masivo”

• Main Authors: Yolanda Elizabeth Morales-García, Andrés Corral-Lugo, Laura Abisaí Pazos-Rojas, Rebeca Débora Martínez-Contreras, Jesús Muñoz-Rojas, Araceli Ramírez-Valverde
• Format: Article
• Language: Spanish
• Published: Universidad Nacional de Colombia 2012-08-01
• Series: Revista Colombiana de Biotecnología
• Subjects: UFC; goteo en placa; plaqueo; vaciado en placa; GSPM; CFU; drop plate; plating; spread plate; MSDP
• Online Access: http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/biotecnologia/article/view/37416

<p class="MsoNormal" style="text-align: justify;"><strong><span style="font-size: 10.0pt; mso-ansi-language: EN-US;" lang="EN-US">Título en ingles: Quantification of cultivable bacteria by the “Massive Stamping Drop Plate” method</span></strong></p> <p class="MsoNormal" style="text-align: justify;"><strong><span style="font-size: 10.0pt;">Resumen: </span></strong><span style="font-size: 10.0pt;">Cuando se desea cuantificar el número de bacterias presentes en múltiples muestras, los procedimientos de rutina suelen consumir mucho tiempo. En ese periodo las muestras podrían sufrir modificaciones en su población. En el presente trabajo se evaluó una metodología alternativa para cuantificar bacterias cultivables de forma masiva, rápida y económica en la que se implica el sellado, estampado o impresión de diluciones seriadas de muestras de diversa procedencia. El tiempo requerido para preparar 22 muestras para su sellado en placa es de 15 minutos. El método se basó en realizar diluciones seriadas (base 10) de las muestras líquidas originales contenidas en una placa multipozos con la ayuda de una pipeta multicanal. Después, con un replicador se tomó un volumen (aproximadamente 1,65 µl) de muestra de cada pozo, que se inoculó por sellado en un medio de crecimiento gelificado de interés. Las placas se incubaron el tiempo necesario, se contó el número de colonias presentes en la dilución contable y se calculó el número de Unidades Formadoras de Colonia por mililitro (UFC/ml) para cada muestra. La metodología se denominó “Goteo por Sellado en Placa Masivo” (GSPM) y ha sido aplicada para cuantificar exitosamente bacterias provenientes de diferentes muestras de laboratorio, por ejemplo, de cultivos líquidos, muestras clínicas (como exudados y secreciones) y bacterias presentes en la rizósfera de plantas de maíz. Sin embargo, la metodología GSPM podría aplicarse para contabilizar masivamente a bacterias de cualquier otra procedencia.</span></p> <p class="MsoNormal" style="text-align: justify;"><strong><span style="font-size: 10.0pt;">Palabras clave</span></strong><span style="font-size: 10.0pt;">: UFC; goteo en placa; plaqueo; vaciado en placa; GSPM.</span></p> <p class="MsoNormal" style="text-align: justify;"><strong><span style="font-size: 10.0pt; mso-ansi-language: EN-US;" lang="EN-US">Abstract: </span></strong><span style="font-size: 10.0pt; mso-ansi-language: EN-US;" lang="EN-US">In an attempt to quantify the number of bacteria present in a high number of samples, routine procedures are usually very time-consuming. During this period of time, bacterial population could be modified. In this work, an alternative for a massive, quick and economic method was evaluated in order to count viable bacteria, consisting in the sealing or stamping of serial dilutions performed in samples from different origins. The time required to prepare 22 samples for plate stamping is only 15 minutes. The quantification was based in performing serial dilutions (10-fold) of the original liquid samples contained in a multiwell plate using a multichannel micropipette. Afterwards, using a replicator, the same volume of each sample (approximately 1,65 µl) was recovered from each well, and then it was inoculated and sealed in a solid growth media of interest. Plates were incubated as needed, colonies were counted in the quantifiable dilution and Colony Forming Units per milliliter (CFU/ml) was calculated for each sample. We called this method “Massive Stamping Drop Plate” (MSDP) and it has been successfully applied to count bacteria from different lab samples, including liquid cultures, clinical samples (exudates and secretions) and bacteria recovered from the rhizosphere of corn plants. However, MSDP could also be applied to massively count bacteria from any other source.</span></p> <p class="MsoNormal"><strong><span style="font-size: 10.0pt; mso-ansi-language: EN-US;" lang="EN-US">Key words</span></strong><span style="font-size: 10.0pt; mso-ansi-language: EN-US;" lang="EN-US">: CFU; drop plate; plating; spread plate; MSDP. </span></p>