Optimización de la técnica rsca para la tipificación de los genes MHC-DRB del mono Aotus nancymaae

• Main Authors: Jefersson Medina Olaya, Lucy Gabriela Delgado Murcia, Manuel Alfonso Patarroyo G.
• Format: Article
• Language: English
• Published: Universidad Nacional de Colombia 2007-01-01
• Series: Acta Biológica Colombiana
• Subjects: Reference Strand Mediated Conformational Analyis; Aotus Nancymaae; DNA
• Online Access: https://revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/27661
• ISSN: 0120-548X; 1900-1649

La investigación en el diseño de vacunas contra la malaria basadas en péptidos sintéticos modificados, requiere del conocimiento de la estructura y variabilidad de las moléculas del sistema inmune implicadas en la unión y presentación de estos antígenos para inducir respuestas inmunes protectivas, dentro de tales moléculas se encuentran las del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) clase II. Estudios de clonación y secuenciación han mostrado un gran polimorfismo en el exón 2 de los genes MHC-DRB del mono Aotus nancymaae, fragmento implicado en la eficacia de las vacunas peptídicas probadas en este modelo animal. Por esto se hace necesaria la implementación de un método confiable y rápido para la tipificación de los genes MHC-DRB con el fin de evaluar la respuesta de los individuos ante las vacunas. La técnica RSCA (Reference Strand Mediated Conformational Analyis) se ha usado como una alternativa para la caracterización de genes del MHC en humanos, cánidos, felinos para aplicaciones clínicas y recientemente en primates no humanos como monos del género Aotus. En este trabajo se han optimizado las condiciones para la realización de RSCA con el empleo de un sistema de separación de fragmentos por electroforesis capilar en el analizador genético ABI Prism 310, en el que no se tienen antecedentes de la tipificación de alelos no humanos. Se obtuvo un panel de muestras control de DNA compuesto por 12 alelos clonados e identificados por secuenciación del exón 2 de 15 individuos. Se escogió el alelo AonaDRB*W3001 para la construcción de una sonda flluoromarcada (FLR) con las que se determinaron patrones de migración para cada alelo. Con los parámetros electrocinéticas de inyección determinados (tiempo inyección 15 s, voltaje inyección 15 kV) y las condiciones de electroforesis (tiempo 16 min, voltaje de corrido 15 kV y temperatura 30 °C) se lograron resolver de manera óptima, reproducible y confiable alelos pertenecientes a los linajes AonaDRB1*03 y AonaDRB3*06. Tras el análisis de árboles filogenéticos se propone el alelo humano HLA-DRB1*1101para la elaboración de una nueva FLR que sirva para caracterizar de forma adecuada individuos que expresen el alelo DRB*W3001 y los que por medio de esta sonda no puedan ser totalmente resueltos. Con este trabajo se contribuyó al conocimiento y caracterización del sistema inmune de los primates del género Aotus en el marco de la búsqueda de métodos inmunoprofilácticos efectivos para el control de enfermedades infecciosas, en particular, malaria por P. vivax y P. falciparum.