| Summary: | === Envenoming by the scorpion Tityus serrulatus is a major health problemin Brazil, especially in the state of Minas Gerais. TsNTxP is a non-toxic and immunogenic protein from the venom of scorpion Tityus serrulatus witch has the property to elicit neutralizing antibodies against the whole venom. The SPOT method of multiple peptide synthesis was used to prepare, on cellulose membranes, a hundred and fifty three overlapping octadecapeptides covering the complete amino acid sequence of TsNTxP in order to map possible conformational epitopes. Anti-TsNTxP neutralizing rabbit antibodies revealed that GREGYPADGGGLPDSVKI is one immunodominant diepitope. This epitope contains two antigenic regions of the TsNTxP, one in the N-terminal part (residues 18 (GREGYPAD)) and the other in the C-terminal part (residues 4754(GLPDSVKI)). After synthesis and purification, antibodies were raised in BALB/c mice against the diepitope conjugated to ovalbumin (OVA) withglutaraldehyde. In vivo protection assays one week after the last immunization showed that immunized mice could resist the challenge of three-fold the LD50 of the T. serrulatus whole venom, a dose that killed all control non-immune mice. The mice immunized with this preparation developed an antibody response that persisted nine weeks after the end of the immunization protocol. Rabbit immunization with the same immunogen produced specific antibodies that werent very efficient in neutralizing the lethal effects of the venom, although they were capable of retarding the envenoming symptoms and the time of death. === O envenenamento pelo escorpião Tityus serrulatus é um problema desaúde pública no Brasil, especialmente no estado de Minas Gerais. TsNTxP é uma proteína não tóxica e imunogênica do veneno do escorpião Tityus serrulatus que possui a propriedade de gerar anticorpos neutralizantes do veneno total cognato. O método de SPOT de síntese múltipla de peptídeos foi utilizado para preparer em membrane de cellulose, 153 octadecapeptídeos sobrepostos cobrindo a seqüência completa da TsNTxP, para mapear seus possíveis epitopos conformacionais. Anticorpos neutralizantes de coelho anti-TsNTxP revelaram que GREGYPADGGGLPDSVKI é um epitopo imunodominante. Esse epitopo contém duas regiões antigênicas da TsNTxP, uma parte N-terminal (resíduos 18 (GREGYPAD)) e outra na porção Cterminal (residuos 4754(GLPDSVKI)). Após a síntese e purificação, anticorpos contra esse diepitopo conjugado à ovalbumina foram gerados em camundongos BALB/c. Ensaios de proteção in vivo feitos uma semana após a última dose da imunização mostrou que os camundongos resistiram ao desafio de 3 LD50 do veneno total de T. serrulatus, uma dose que matou todos os camundongos controle não imunizados. Os camundongos imunizados com o diepitopo desenvolveram uma resposta que persistiu por nove semanas após otérmino do protocolo de imunização. A imunização de coelhos com o mesmo imunógeno produziu anticorpos específicos que, apesar de serem capaz de retardar os sintomas de envenenamento e o tempo de morte, não foram tão eficientes na neutralização dos efeitos letais do veneno.
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