Desempenho da pesquisa de anticorpos antiTrypanosoma cruzi, por citometria de fluxo, na monitoração precoce de cura pósterapêutica etiológica da doença de Chagas

• Main Author: Ana Paula Barbosa Wendling
• Other Authors: Silvana Maria Eloi Santos
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Minas Gerais 2006
• Online Access: http://hdl.handle.net/1843/ECJS-7GJN9A

=== Specific therapy of chronic Chagas disease aims mainly to reduce parasitemia, besides preventing and reducing symptoms. However, monitoring treatment efficacy still remains unclear due to the lack of laboratorial methods that could certify a complete parasitological cure. Currently, the cure criteria used by various researchers is based on repeated serological and parasitological negative tests. Several studies have shown that serology can remain positive for decades after specific therapeutics. The introduction of highly sensitive techniques such as specific antibodies detection by flow citometry brought new perspectives in Chagas disease cure monitoring. Herein, we developed two studies aiming to evaluate the performance of FC-AFEA and FC-ALTA techniques on post therapeutic evaluation. Our results showed that in a retrospective study using a population with 10 to 15 years of followup after specific therapeutics (n=60), FC-AFEA was capable to segregate cured chagasic patients from non cured ones. Since the method presents a very high sensitivity, some modifications on the original technique, like the utilization of higher dilutions and higher cutoffs, were shown to be necessary. In a prospective study along five years of post therapeutic follow-up (n=44), none of the serological methods used (FC-AFEA, FC-ALTA, IIF, IHA, ELISA, PaGIA) evidenced seronegativity. Nevertheless, we observed that the etiological treatment induced a decrease on FC-AFEA and FC-ALTA reactivity intensity. In addition, in patients presenting post therapy negative hemocultures (TEA), we could identify two subgroups of patients based on their magnitude of reactivity decrease. It is possible that patients with therapeutic success are included in the subgroup presenting higher reactivity decrease. Among the conventional serological tests applied in this study, IHA showed more titer variations, creating difficulties for its use on cure monitoring. IIF was capable to identify reactivity decrease in more than 2 titers in some patients of TEA group. ELISA and PaGIA, in the way they are standardized for diagnostic proposal, were not able to segregate treated and non-treated patients, indicating that modifications on the criterion have to be made for cure monitoring. Therefore, we conclude serology presents important limitations on early cure definition after etiological treatment of chronic Chagas disease. Seroreversion seems to be an inadequate approach for this purpose. Studies should be supported in order to investigate other markers associated to the presence of active infection other than searching for anti-T. cruzi antibodies. === O objetivo da terapeutica especifica da fase cronica da doenca de Chagas e a reducao da parasitemia, alem da prevencao e reducao dos sintomas. Entretanto, a monitoracao da eficacia do tratamento ainda e insatisfatoria, devido a ausencia de metodos laboratoriais que certifiquem a cura. Atualmente, o criterio de cura utilizado por diversos pesquisadores baseiase na negativacao de testes sorologicos e parasitologicos. Diversos estudos mostram que apos a terapia especifica, os testes sorologicos podem permanecer positivos por decadas. A introducao de tecnicas mais sensiveis como a pesquisa de anticorpos por citometria de fluxo trouxe novas perspectivas no monitoramento de cura da doenca de Chagas. Neste contexto, realizamos dois estudos que objetivaram avaliar o desempenho das tecnicas de FC-AFEA e FC-ALTA na avaliacao pos-terapeutica. Nossos resultados mostraram que, em um estudo retrospectivo em uma populacao com 10 a 15 anos de acompanhamento pos-terapeutico (n=60), a FC-AFEA foi capaz de discriminar pacientes chagasicos curados daqueles nao curados. Em virtude da alta sensibilidade do metodo, foram necessarias modificacoes do criterio de positividade da tecnica original utilizado para diagnostico, como o emprego de diluicoes mais altas e elevacao do ponto de corte. Em outro estudo, prospectivo, ao longo de cinco anos de acompanhamento pos-terapeutico (n=44), nenhum dos metodos sorologicos utilizados (FC-AFEA, FC-ALTA, IFI, HAI, ELISA, PaGIA) evidenciou soronegatividade. Entretanto, observou-se que o tratamento etiologico induziu queda na reatividade de FCAFEA e FC-ALTA. Ainda, no grupo de pacientes tratados que apresentavam hemoculturas pos-tratamento negativas (TEA), foi possivel identificar dois subgrupos de pacientes de acordo com a magnitude da queda na reatividade, sendo provavel que pacientes com sucesso terapeutico estejam compreendidos entre aqueles que evoluiram com maior queda de reatividade. Dentre os testes sorologicos convencionais empregados tambem nesta populacao, a HAI mostrou maior variacao dos titulos, dificultando seu emprego na monitoracao recente de cura e mostrando-se insatisfatorio no controle de cura. A IFI foi capaz de identificar queda na reatividade . 2 titulos em alguns pacientes do grupo TEA. A ELISA e o PaGIA, da forma como estao padronizados para uso no diagnostico, nao foram capazes de segregar pacientes tratados ou nao, indicando que para seu uso na monitoracao de cura, os criterios de positividade devam ser adequados. Conclui-se que o uso de testes sorologicos apresenta limitacoes na definicao de cura precoce apos tratamento etiologico da forma cronica da doenca de Chagas. A verificacao de ausencia de anticorpos anti-proteinas derivadas do agente infeccioso parece ser um criterio inadequado de cura. Devem-se incentivar estudos objetivando a procura de outros marcadores associados a presenca ativa da infeccao que nao a presenca de anticorpos anti-T. cruzi.