Taxonomia integrativa de espécies de Aphelenchoides associadas a sementes de gramíneas forrageiras e desenvolvimento de diagnóstico baseado em PCR em tempo real

• Main Author: Jesus, Dalila Sêni de
• Other Authors: Oliveira, Claudio Marcelo Gonçalves de
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Viçosa 2015
• Subjects: Fitonematóides; Aphelenchoides; Plantas forrageiras - Sementes; Diagnóstico molecular; Fitopatologia
• Online Access: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/6637

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas ([e-mail]) on 2015-11-11T14:40:30Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2597471 bytes, checksum: d356a04cdee8348ea7e9d4ca548e8b79 (MD5) === Made available in DSpace on 2015-11-11T14:40:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2597471 bytes, checksum: d356a04cdee8348ea7e9d4ca548e8b79 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 === Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico === A associação de Aphelenchoides besseyi a sementes de gramíneas forrageiras tem implicações quarentenárias que limitam a sua comercialização para muitos dos países importadores das sementes brasileiras. Como várias outras espécies de Aphelenchoides sem importância econômica são relatadas em associação a sementes de forrageiras, é imprescindível a identificação precisa de A. besseyi. Deste modo, realizaram-se as caracterizações morfológica, morfométrica e molecular de populações de A. besseyi associadas a sementes de forrageiras cultivadas no Brasil, comparando-as com populações de A. besseyi provenientes da Costa Rica, Espanha e Japão. Primers e sondas específicos foram desenhados, a partir da região LSU rDNA, e testados usando PCR em tempo real. A caracterização das regiões SSU, LSU e COI comprovaram a ocorrência de uma espécie geneticamente distante de A. besseyi associada às sementes de forrageiras no Brasil. De acordo com as análises filogenéticas das regiões SSU e COI, esta outra espécie, trata-se de A. fujianensis. Foi possível desenvolver e usar os ensaios diagnósticos para a detecção de A. besseyi e A. fujianensis. Com o uso dos primers/sonda específicos foi possível detectar o DNA alvo extraído a partir de um único nematoide. Ainda, foram identificadas duas sequências distintas na região LSU em uma população de A. besseyi, constituindo o primeiro relato da ocorrência de variabilidade intraindividual na região LSU do rDNA nesta espécie. Em adição, a alta identidade de uma destas sequências à A. fujianensis reforçou a proximidade filogenética destas espécies e a necessidade de uma extensiva investigação para se estimar a frequência deste fenômeno. === The association Aphelenchoides besseyi gramineous forage seed has quarantine implications that limit their marketing for many of the importing countries of these seeds. As many other Aphelenchoides species with no economic importance are reported in association with forage seeds, it is essential an accurate identification of A. besseyi. Thus, morphological, morphometric and molecular characterizations was undertaken using A. besseyi populations associated with gramineous forage seeds grown in Brazil, comparing to populations of A. besseyi from Costa Rica, Spain and Japan. Specific primers and probes were designed from LSU rRNA gene, and tested using real time PCR assays. The characterization of SSU, LSU, and COI proved the occurrence of a species genetically distinct from A. besseyi associated with gramineous forage seeds in Brazil. According to the phylogenetic analyzes of SSU and COI regions, this species is A. fujianensis. It was possible to develop diagnostic assays and use them to detect A. besseyi and A. fujianensis. The primers and probes were able to detect the DNA target extracted from a single nematode. Furthermore, two different sequences were identified in the LSU gene in one of A. besseyi populations studied, constituting the first report of intra-individual variation in LSU rDNA for this species. In addition, the high identity of one of these sequences with A. fujianensis reinforced the phylogenetic proximity of these species and the need for extensive research to estimate the frequency of this phenomenon.