| Summary: | Made available in DSpace on 2014-07-29T15:13:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1
Tese2011_Luciana_Bradstetter.pdf: 2039765 bytes, checksum: fc789f9ab9e7cf36309b7d69f8c21304 (MD5)
Previous issue date: 201-11-18 === Mechanic obstruction of blood vessels that irrigate the intestine leads to ischemia and intense reduction of oxygenation and tissue perfusion. If oxygenated blood flow returns abruptly to tissues before cellular death reperfusion injury occurs; this can be initiated by several mechanisms resulting in inflammatory response. Intestinal ischemia/reperfusion (I/R) injury has been widely associated to cell necrosis, although another distinct biochemical and morphological type of cell death, called apoptosis, is involved. Such conditions are mediated by signaling molecules in cellular surface, which lead to long term changes in gene expression. In the majority of cells, MAP (Mitogen Activated Protein) kinases (MAPK), which are part of a group of cytoplasmic enzymes, will transmit mitogenic and cell differentiation signs. Three MAPK that have been identified in mammalian cells participate in the signaling pathway: ERK, p38 and JNK. Activated p38 and JNK are usually related to apoptosis, while activated ERK 1/2 (P44/42) have a protection function inhibiting apoptosis. With the purpose of minimizing reperfusion injury after liver transplant, Carolina Rinse Solution (CRS) was designed by North Carolina University, USA. Although this solution has been used in horses to attenuate I/R injury in horse intestine, little is known about the eventual tissue protection mechanism. The present study aimed to investigate the effects of topical and intraluminal CRS in I/R injury, and the activation profile of p38 and ERK 1/2 MAPK, in rabbit jejunum. Fifteen New Zealand rabbits were allocated to three groups: Sham-operated (A), Ischemia and reperfusion (B) and CRS (C). Groups B and C were subjected to one hour of jejunal ischemia and two hours of reperfusion. In group C, ten minutes prior to reperfusion, the bowel lumen was filled with CRS, and the segment was immersed in CRS until reperfusion onset. Changes such as degeneration, necrosis, edema, hemorrhage, PMN infiltration and margination were not significantly different between groups B and C, showing that topical and intraluminal CRS did not attenuate deleterious effects of I/R in small intestinal of rabbits. I/R stimulated the phosphorylation of p44/42 MAPK and p38 MAPK pathways in some layers of jejunum. Progressive activation of p44/42 MAPK was chiefly localized to the crypts of Lieberkühn, circular and longitudinal muscle layers, whereas p38 MAPK was prominently activated in myenteric plexus and both muscle layers. All layers that did respond to I/R insult with activation increase of ERK 1/2 and p38, in all groups, showed low baseline phosphorylation levels as compared to those that did not react to the insult. The results of this work indicate that topical and intraluminal CRS does not interfere in ERK 1/2 and p38 activation profile in rabbit jejunum subjected to I/R. === A obstrução mecânica de vasos sanguíneos que irrigam o intestino leva à isquemia, com redução na oxigenação e perfusão teciduais. Se o fluxo sanguíneo oxigenado retorna aos tecidos bruscamente antes da morte celular, ocorre a chamada injúria de reperfusão, a qual pode ser iniciada por vários mecanismos, levando a uma resposta inflamatória. A injúria de isquemia e reperfusão (I/R) tem sido amplamente associada à necrose celular, apesar de um tipo bioquímico e morfológico distinto de morte celular, chamada de apoptose, também esteja envolvida. Tais processos são mediados por moléculas de sinalização na superfície das células, as quais levam a mudanças na expressão dos genes. Na maioria das células, as MAP (Mitogen Activated Protein) quinases (MAPK), as quais são parte de um grupo de enzimas citoplasmáticas, transmitem os sinais mitogênicos e de diferenciação. Três MAPK que foram identificadas em células de mamíferos participam do mecanismo de sinalização: ERK, p38 e JNK. As MAPK p38 e JNK ativadas normalmente estão associadas à apoptose, enquanto ERK 1/2 (P44/42) ativada tem função de inibição da apoptose. Com o propósito de minimizar a injúria de reperfusão após o transplante de fígado, a solução de Carolina Rinse (CRS) foi desenvolvida pela Universidade da Carolina do Norte nos EUA. Essa solução tem sido utilizada para minimizar os efeitos da I/R em intestino de eqüinos, mas pouco se sabe do seu possível mecanismo de ação protetora. O presente estudo objetivou investigar os efeitos do uso tópico e intraluminal da CRS na injúria de I/R e no perfil de ativação das MAPK p38 e ERK 1/2 no jejuno de coelhos. Quinze coelhos da raça Nova Zelândia foram alocados em três grupos: Instrumentado (A), Isquemia e reperfusão (B) e CRS (C). Os grupos B e C foram submetidos a uma hora de isquemia e duas horas de reperfusão de jejuno. No grupo C, dez minutos antes da reperfusão, o lumen do segmento foi preenchido com CRS e o mesmo foi imerso em CRS até o início da reperfusão. Mudanças como degeneração, necrose, edema, hemorragia, infiltrado e marginação de PMN não foram significativamente diferentes entre os grupos B e C, o que mostra que o uso tópico e intraluminal da CRS não atenuou os efeitos deletérios da I/R no intestino delgado de coelhos. A I/R estimulou a fosforilação das MAPK p44/42 e p38 em algumas camadas do jejuno. A ativação progressiva de p44/42 ocorreu principalmente nas criptas de Lieberkühn e nas camadas musculares circular e longitudinal, enquanto a MAPK p38 foi ativada principalmente no plexo mioentérico e em ambas as camadas musculares. Todas as camadas que responderam ao insulto da I/R com aumento da ativação de ERK 1/2 e p38, em todos os grupos, apresentaram baixos níveis basais de fosforilação, quando comparados àquelas que não responderam ao insulto. Os resultados desse estudo indicam que o uso tópico e intraluminal da CRS não interfere no perfil de ativação de ERK 1/2 e p38 no jejuno de coelhos submetidos à I/R.
|
|---|
