| Summary: | Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2017-04-03T14:55:33Z
No. of bitstreams: 2
license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)
dissertação final_bbc.pdf: 741010 bytes, checksum: 2a9032403833869b2c43a2062da8fcd6 (MD5) === Made available in DSpace on 2017-04-03T14:55:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2
license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5)
dissertação final_bbc.pdf: 741010 bytes, checksum: 2a9032403833869b2c43a2062da8fcd6 (MD5)
Previous issue date: 2015-09-02 === FACEPE === A Influenza é uma doença infecciosa aguda, causada por um vírus
pertencente à família Orthomyxoviridae. As drogas antivirais e a vacinação são
importantes no controle da disseminação da doença, porém alguns vírus adquirem
resistência a certas drogas, alertando a necessidade de novas drogas. Triagem de
antivirais através de ensaios biológicos são laboriosos e demorados. Com intuito de
facilitar a triagem de drogas foram desenvolvidas duas linhagens celulares
repórteres distintas. A linhagem Vero-Gluc-NS-Neo é específica para o vírus da
influenza, expressa o gene Gaussia luciferase na presença do vírus, e foi
desenvolvida através da tranfecção de células Vero com o plasmídeo pGluc-NSNeo.
A segunda linhagem, denominada de A549-ISRE-Luc-Hygro, foi desenvolvida a
partir da transfecção de células A549 com o plasmídeo pISRE-Luc-Hygro, o qual
expressa o gene repórter Firefly luciferase na presença do interferon do tipo (IFN-I).
Seguida da transfecção, ambas linhagens foram selecionadas e submetidas a uma
clonagem biológica por diluição limitante e os clones selecionados foram então
caracterizados quanto à sua especificidade e sensibilidade no ensaio. Resultados
importantes e promissores foram obtidos com a linhagem A549-ISRE-Luc-Hygro, a
qual se mostrou eficiente para a triagem de antivirais para influenza e drogas
indutoras do IFN-I. Em relação à linhagem Vero-Gluc-NS-Neo, apesar do plasmídeo
construído se mostrar funcional e específico, não foi possível observar a expressão
do gene repórter após a infecção viral, trazendo à tona questionamentos e
mostrando ser necessária a realização de ensaios complementares === Influenza is an acute infectious disease caused by viruses belonging to the
Orthomyxoviridae family. Antiviral drugs are vital in controlling the spread of the
disease, but some viruses become resistant to certain drugs, prompting the need for
new drugs. Antiviral screening through biological tests are laborious and time
consuming. In order to facilitate the screening of drugs, it was developed two distinct
cell lineages reporters. The Vero-Gluc-Neo-NS cells line is specific for the influenza
virus expresses the Gaussia luciferase gene in the presence of the virus, and it was
developed by transfection of Vero cells with pGluc-NS-Neo plasmid. The second cell
line, A549-called ISRE-Luc-Hygro, was developed from the transfection of A549 cells
with pISRE-Hygro-Luc plasmid, which expresses the Firefly luciferase reporter gene
in the presence of type one interferon (IFN-I). Followed by transfection, both cell lines
were selected and subjected to a biological cloning by limiting dilution and selected
clones were then characterized for specificity and sensitivity in the assay. Important
and promising results were obtained with A549-Hygro-ISRE-Luc cells, which proved
to be efficient for screening of antiviral drugs for influenza and IFN-I inducing drugs.
Regarding the Vero-Gluc-NS-Neo cell line, despite the plasmid constructed to show
functional and specific, it was not possible to observe the reporter gene expression
after viral infection, bringing up questions and shown to be necessary to carry out
further testing.
|
|---|
