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Previous issue date: 2011 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === A resposta imune inata em processos infecciosos é conhecida por sofrer alterações em
decorrência de estados de desnutrição. Assim, o objetivo deste estudo foi de comparar a
cinética da produção de óxido nítrico (ON) e a viabilidade de macrófagos alveolares
(MA), após infecção celular in vitro, com Staphylococcus aureus meticilina-sensível
(MSSA), e meticilina-resistente (MRSA) entre grupos de ratos nutridos (N) ou
submetidos à desnutrição neonatal (D). Ratos machos Wistar (n=45) foram divididos
em dois grupos distintos, de acordo com a dieta utilizada: N (ratos amamentados por
mães submetidas à dieta com 17% de caseína) e D (ratos amamentados por mães
submetidas à dieta nutricionalmente deficiente com 8% de caseína). Após o período de
amamentação, os animais foram submetidos a um longo período de reposição
nutricional, com Labina. Os MA foram coletados através da técnica do lavado
broncoalveolar, após traqueostomia. O isolamento dos MA foi realizado por adesão em
placas, sendo distribuídos na proporção de 106 células/mL de RPMI. Após o isolamento
dos MA, foram estabelecidos quatro sistemas: controle negativo (CN), contendo apenas
MA; controle positivo (CP), MA mais 10μL de LPS (lipopolissacarídeo); MSSA, MA
mais 100μL de suspensão bacteriana (ATCC 29213) (densidade óptica de 0.15,
equivalente a 10-6 CFUmL-1) e MRSA, MA mais 100μL de suspensão bacteriana
(ATCC 33591). As placas foram incubadas à 37ºC, com atmosfera úmida e 5% de CO2.
A cada duas horas, num total de 24 horas de incubação, foram retirados 100μL do
sobrenadante das culturas. A quantificação do ON baseou-se na reação de Griess,
através da determinação da concentração de nitritos. A leitura foi realizada em leitor de
ELISA, filtro-550nm. A viabilidade dos MA foi analisada após 24 horas de incubação
dos sistemas, e avaliada pela redução mitocondrial do 3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]-2,5-
brometo de difenil tetrazólico (MTT) à formazam. A quantificação do formazam
solubilizado foi realizada em leitor de ELISA com filtro de 570nm. Utilizou-se teste t-
Student e Mann-Whitney, admitindo-se p<0,05. A desnutrição acarretou diminuição do
crescimento ponderal dos animais, da liberação de ON nos sobrenadantes das culturas e
da viabilidade dos macrófagos. Houve menor produção de ON no MRSA quando
comparado com MSSA, entretanto, a partir das 12h, não foi detectada diferença entre os
sistemas, permanecendo até 24h. Ao avaliar a viabilidade dos macrófagos entre os
sistemas, ocorreu maior redução no MRSA do grupo desnutrido. Pode-se concluir que o
modelo de desnutrição neonatal adotado promoveu alteração na função das células
fagocitárias, comprometendo o estresse nitrosativo e a viabilidade dos macrófagos
alveolares. Além disto, há evidências de diferenças no mecanismo de evasão do sistema
imune entre as cepas MSSA e MRSA
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