Clonagem e expressão de um fragmento recombinante da proteína de 28 KDa do vírus da síndrome da mancha branca (WSSV) de camarões

• Main Author: Braünig, Patrícia
• Other Authors: Universidade Federal de Santa Catarina
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: 2012
• Subjects: Biotecnologia; Proteínas Recombinantes; Diagnostico; Metodos
• Online Access: http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/92760

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2009 === Made available in DSpace on 2012-10-24T11:58:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 269692.pdf: 913786 bytes, checksum: 13e90e5a3ec769acc38839c40bde474c (MD5) === O vírus da síndrome da mancha branca (WSSV) é o agente infeccioso que trouxe maiores prejuízos à carcinicultura brasileira e mundial. Métodos de detecção do vírus são importantes na medida em que possibilitam a identificação da infecção dos camarões, permitindo que os criadores tomem medidas de contenção da disseminação viral, amenizando assim as perdas econômicas. As proteínas estruturais do WSSV, principalmente a VP28, são amplamente empregadas na obtenção de anticorpos poli e monoclonais, que por sua vez são utilizados no desenvolvimento de testes de detecção do WSSV. A síntese protéica em sistemas recombinantes é amplamente empregada para obtenção de proteínas recombinantes. Neste estudo, a região gênica mais hidrofílica da proteína do envelope viral VP28 foi amplificada, clonada, seqüenciada e expressa. A expressão por meio da cepa de E. coli BL21(DE3) plysS resultou em uma proteína recombinante de aproximadamente 21 KDa, denominada VP28r. A proteína recombinante possui uma cauda de histidinas na região N-terminal e permaneceu no interior da bactéria na forma de agregados insolúveis conhecidos como corpos de inclusão. Os corpos de inclusão foram solubilizados com uréia 8M e a proteína foi purificada através de cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados em condições desnaturantes. A metodologia para expressão e purificação da VP28r desenvolvida no presente estudo demonstrou um bom rendimento protéico final possibilitando o futuro emprego desta proteína na produção de anticorpos que potencialmente podem ser empregados no desenvolvimento de testes de detecção do WSSV.