Enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação
Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2016-09-19T12:26:32Z No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) === Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:18:22Z (GMT) No. of bitstre...
Main Author: | |
---|---|
Other Authors: | |
Language: | Portuguese |
Published: |
Universidade Federal de São Carlos
2016
|
Subjects: | |
Online Access: | https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/7338 |
id |
ndltd-IBICT-oai-repositorio.ufscar.br-ufscar-7338 |
---|---|
record_format |
oai_dc |
collection |
NDLTD |
language |
Portuguese |
sources |
NDLTD |
topic |
Enzimas Cromatografia líquida de alta eficiência Espectrometria de massa Atividade enzimática CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA::QUIMICA ORGANICA |
spellingShingle |
Enzimas Cromatografia líquida de alta eficiência Espectrometria de massa Atividade enzimática CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA::QUIMICA ORGANICA Almeida, Fernando Gonçalves de Enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação |
description |
Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2016-09-19T12:26:32Z
No. of bitstreams: 1
TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) === Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:18:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1
TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) === Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:18:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1
TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) === Made available in DSpace on 2016-09-21T18:18:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1
TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5)
Previous issue date: 2015-05-22 === Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) === Angiotensin converting enzyme 1 (ACE1) is a dipeptidyl carboxypeptidase that
converts angiotensin I (decapeptide) to a vasoconstrictor octapeptide angiotensin
II. Thus, ACE presents an important role in blood pressure regulation. There are
many synthetic commercially available ACE inhibitors such as captopril, lisinopril
and enalapril. Due to their side effects, naturally occurring inhibitors have been
prospected. In order to endorse this research field we have developed a new tool
for ACE ligand screening. To this end, ACE was extracted from bovine lung,
purified and chemically immobilized in modified ferrite magnetic beads (ACEMBs).
The ACE-MBs have shown a Michaelian kinetic behavior towards hippurylhistidyl-
leucine (HHL) and was also able to catalyze the conversion of angiotensin
I to angiotensin II. Moreover, as proof of concept, the ACE-MBs was inhibited by
lisinopril with an IC50 of 10 nM. At the fishing assay, ACE-MBs were able not only
to fish out the reference inhibitor, but also three peptides from a pool of tryptic
digested BSA. ACE-MBs emerge as new straightforward tool for ACE kinetics
determination, inhibition and binder screening. === Enzima conversora de angiotensina 1 (angiotensin converting enzyme 1, ACE1) é
uma dipeptidil carboxipeptidase que catalisa a reação para conversão da
angiotensina I, um decapeptídeo inativo, para angiotensina II, um octapeptídeo
vasoconstritor. Assim, a ACE1 exerce um papel essencial na regulação da
pressão arterial e tratamento de hipertensão. Existem diversos inibidores de
ACE1 sintéticos disponíveis comercialmente, como captopril, lisinopril e enalapril.
No entanto, o uso contínuo desses fármacos pode causar diversos efeitos
adversos como falência renal, hipotensão e hipercalemia. Devido a isso,
inibidores de ACE1 de origem natural tem sido prospectados. Com o objetivo de
contribuir para esse campo de pesquisa, neste trabalho foi desenvolvido uma
ferramenta para a busca de ligantes de ACE1. Para isso, a ACE1 foi extraída de
pulmão bovino e subsequentemente purificada com o auxílio de filtros de exclusão
por tamanho e mais duas etapas de cromatografia de afinidade. Para acompanhar
o processo de purificação, ensaios de atividade utilizando o substrato sintético
hipuril-histidil-leucina (HHL) foram estabelecidos, e foi desenvolvido um método
cromatográfico para suas análises, através do monitoramento do ácido hipúrico
(HA), produto da reação catalisada. Após a sua purificação, a ACE foi
quimicamente imobilizada em partículas nanomagnéticas (NMB-ACE), que
permitiu a realização de ensaios enzimáticos para a sua caracterização, obtendose
um comportamento michaeliano para o substrato HHL. Além disso, a
especificidade do reator enzimático foi testado frente a seu substrato natural e
testes de inibição com o lisinopril foram realizados, obtendo um valor de IC50
próximo ao encontrado para a enzima livre. Por fim, a seletividade do reator
enzimático foi avaliada pelo ensaio de bioconjugação, resultando na pesca de 3
peptídeos presente em uma mistura de mais de 100 peptídeos. Sendo assim, os
estudos apresentados nesse trabalho confirmam o estabelecimento do NMB-ACE
como uma ferramenta para a busca de ligantes de ACE em misturas complexas. |
author2 |
Cass, Quezia Bezerra |
author_facet |
Cass, Quezia Bezerra Almeida, Fernando Gonçalves de |
author |
Almeida, Fernando Gonçalves de |
author_sort |
Almeida, Fernando Gonçalves de |
title |
Enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação |
title_short |
Enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação |
title_full |
Enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação |
title_fullStr |
Enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação |
title_full_unstemmed |
Enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação |
title_sort |
enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação |
publisher |
Universidade Federal de São Carlos |
publishDate |
2016 |
url |
https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/7338 |
work_keys_str_mv |
AT almeidafernandogoncalvesde enzimaconversoradeangiotensina1purificacaoimobilizacaoebioconjugacao |
_version_ |
1718650825495019520 |
spelling |
ndltd-IBICT-oai-repositorio.ufscar.br-ufscar-73382018-05-23T20:11:10Z Enzima conversora de angiotensina 1 : purificação, imobilização e bioconjugação Almeida, Fernando Gonçalves de Cass, Quezia Bezerra Enzimas Cromatografia líquida de alta eficiência Espectrometria de massa Atividade enzimática CIENCIAS EXATAS E DA TERRA::QUIMICA::QUIMICA ORGANICA Submitted by Alison Vanceto (alison-vanceto@hotmail.com) on 2016-09-19T12:26:32Z No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:18:22Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) Approved for entry into archive by Marina Freitas (marinapf@ufscar.br) on 2016-09-21T18:18:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) Made available in DSpace on 2016-09-21T18:18:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TeseFGA.pdf: 2851839 bytes, checksum: e4c958d9e4050def8714e03f741d0fff (MD5) Previous issue date: 2015-05-22 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Angiotensin converting enzyme 1 (ACE1) is a dipeptidyl carboxypeptidase that converts angiotensin I (decapeptide) to a vasoconstrictor octapeptide angiotensin II. Thus, ACE presents an important role in blood pressure regulation. There are many synthetic commercially available ACE inhibitors such as captopril, lisinopril and enalapril. Due to their side effects, naturally occurring inhibitors have been prospected. In order to endorse this research field we have developed a new tool for ACE ligand screening. To this end, ACE was extracted from bovine lung, purified and chemically immobilized in modified ferrite magnetic beads (ACEMBs). The ACE-MBs have shown a Michaelian kinetic behavior towards hippurylhistidyl- leucine (HHL) and was also able to catalyze the conversion of angiotensin I to angiotensin II. Moreover, as proof of concept, the ACE-MBs was inhibited by lisinopril with an IC50 of 10 nM. At the fishing assay, ACE-MBs were able not only to fish out the reference inhibitor, but also three peptides from a pool of tryptic digested BSA. ACE-MBs emerge as new straightforward tool for ACE kinetics determination, inhibition and binder screening. Enzima conversora de angiotensina 1 (angiotensin converting enzyme 1, ACE1) é uma dipeptidil carboxipeptidase que catalisa a reação para conversão da angiotensina I, um decapeptídeo inativo, para angiotensina II, um octapeptídeo vasoconstritor. Assim, a ACE1 exerce um papel essencial na regulação da pressão arterial e tratamento de hipertensão. Existem diversos inibidores de ACE1 sintéticos disponíveis comercialmente, como captopril, lisinopril e enalapril. No entanto, o uso contínuo desses fármacos pode causar diversos efeitos adversos como falência renal, hipotensão e hipercalemia. Devido a isso, inibidores de ACE1 de origem natural tem sido prospectados. Com o objetivo de contribuir para esse campo de pesquisa, neste trabalho foi desenvolvido uma ferramenta para a busca de ligantes de ACE1. Para isso, a ACE1 foi extraída de pulmão bovino e subsequentemente purificada com o auxílio de filtros de exclusão por tamanho e mais duas etapas de cromatografia de afinidade. Para acompanhar o processo de purificação, ensaios de atividade utilizando o substrato sintético hipuril-histidil-leucina (HHL) foram estabelecidos, e foi desenvolvido um método cromatográfico para suas análises, através do monitoramento do ácido hipúrico (HA), produto da reação catalisada. Após a sua purificação, a ACE foi quimicamente imobilizada em partículas nanomagnéticas (NMB-ACE), que permitiu a realização de ensaios enzimáticos para a sua caracterização, obtendose um comportamento michaeliano para o substrato HHL. Além disso, a especificidade do reator enzimático foi testado frente a seu substrato natural e testes de inibição com o lisinopril foram realizados, obtendo um valor de IC50 próximo ao encontrado para a enzima livre. Por fim, a seletividade do reator enzimático foi avaliada pelo ensaio de bioconjugação, resultando na pesca de 3 peptídeos presente em uma mistura de mais de 100 peptídeos. Sendo assim, os estudos apresentados nesse trabalho confirmam o estabelecimento do NMB-ACE como uma ferramenta para a busca de ligantes de ACE em misturas complexas. 2016-09-21T18:18:35Z 2016-09-21T18:18:35Z 2015-05-22 info:eu-repo/semantics/publishedVersion info:eu-repo/semantics/doctoralThesis https://repositorio.ufscar.br/handle/ufscar/7338 por info:eu-repo/semantics/openAccess Universidade Federal de São Carlos Câmpus São Carlos Programa de Pós-graduação em Química UFSCar reponame:Repositório Institucional da UFSCAR instname:Universidade Federal de São Carlos instacron:UFSCAR |