| Summary: | Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === Ocimum gratissimum L. (Lamiaceae), known as alfavaca, is widely distributed in tropical and
warm-temperature regions. It is used as a food flavoring and for medicinal purposes against
infectious diseases. Its biological properties are attributed to the presence of thymol or
eugenol-rich essential oils. This study describes qualitative and quantitative variations in
essential oils from stems, inflorescences and leaves of O. gratissimum L. grown in southern
Brazil, in two harvest periods. The evaluation of eugenol content, antibacterial activity and
toxicity of the different ethanolic extracts from dried aerial parts of O. gratissimum were
studied. Afterwards, the essential oil from fresh inflorescences had its antibacterial activity,
toxicity and chemical composition determined. The essential oils were obtained by
hydrodistillation and analyzed by GC/MS. The extracts were obtained by maceration, soxhlet,
ultrasonic cleaning bath, ultrasonic horn and microwave-assisted extractions. Eugenol content
was determined by GC-FID using the pure compound isolated from aerial parts of the plant as
reference. Antibacterial activity was assayed by microdilution method as established by
CLSI/NCCLS. Toxicity was verified by brine shrimp (Artemia salina L.) lethality test. The
major compounds of all essential oils were eugenol (52.6 - 89.2 %) and γ-muurolene (6.2
35.3 %). The harvest season influenced only the yields of inflorescence and stem essential
oils. The low seasonal variation of eugenol in the essential oil of the leaves indicated that
these are the best source to obtain this compound. Inflorescences essential oil was
bacteriostatic (MIC between 0.5-2 mg/mL) and bactericidal (MBC between 1-4 mg/mL)
against all strains tested. Significant differences (P<0.05) among the extractive methods used
to the obtention of ethanolic extracts were observed in all analyses. Higher antimicrobial
activity was verified to extracts compared to the essential oil tested against S. aureus ATCC
25923 and clinical isolate of B. cereus, MRSA (MIC of 0.66 mg/mL), ESBL and Shigella
flexneri (MIC of 1.32 mg/mL). Bactericidal activity of the extracts was verified in Grampositive
bacteria. Eugenol content did not explain all differences obtained among the
antimicrobial activities of the tested extracts. The results suggest synergistic action among
phyto-constituents. Maceration was considered the best extraction process considering the
biological activities of all extracts. The antimicrobial avaliation results confirmed the brine
shrimp lethality test as predictive method for this activity. === Ocimum gratissimum L. (Lamiaceae), conhecida popularmente como alfavaca, é uma planta
amplamente distribuída em regiões de clima tropical e temperado. É utilizada como
aromatizante de alimentos e medicinalmente no combate a doenças infecciosas. Suas
propriedades biológicas têm sido atribuídas à presença de óleo essencial rico em timol ou
eugenol. Este trabalho descreve as variações qualitativas e quantitativas nos óleos essenciais
obtidos a partir dos talos, inflorescências e folhas desta espécie cultivada no Sul do Brasil em
relação ao período de coleta. Também descreve a avaliação da atividade antibacteriana,
toxicidade e teor de eugenol nos extratos etanólicos brutos das partes aéreas secas de O.
gratissimum obtidos por diferentes metodologias. O óleo essencial obtido a partir das
inflorescências frescas deste vegetal teve sua composição química, atividade antibacteriana e
toxicidade estudadas. Os óleos essenciais foram obtidos por hidrodestilação e analisados por
CG/EM. Os extratos etanólicos foram obtidos através dos métodos de maceração, soxhlet,
banho de ultrassom, sonda de ultrassom e micro-ondas. O conteúdo de eugenol nos extratos
foi determinado por CG-FID utilizando eugenol obtido das partes aéreas de O. gratissimum
como padrão. A avaliação da atividade antibacteriana foi realizada pelo método de
microdiluição em caldo (CLSI/NCCLS). O teste de letalidade frente à Artemia salina L. foi
utilizado para análise da toxicidade. Os constituintes majoritários de todos os óleos foram
eugenol (52,6 - 89,2 %) e γ-muuroleno (6,2 35,3 %). Apenas os óleos essenciais das
inflorescências e talos tiveram seus rendimentos influenciados pela estação de coleta. A
pequena variação no teor de eugenol presente no óleo essencial das folhas indicou ser esta a
melhor parte do vegetal para a obtenção deste composto. O óleo essencial das inflorescências
foi bacteriostático (CIM entre 0,5-2 mg/mL) e bactericida (CBM entre 1-4 mg/mL) frente a
todas as cepas bacterianas testadas. Os extratos etanólicos demonstraram diferenças
significativas (P< 0.05) entre si em relação a rendimento, teor de eugenol, atividade
antibacteriana e toxicidade. Maior atividade antimicrobiana foi verificada para os extratos
comparado ao óleo essencial testado frente à S. aureus ATCC 25923 e aos isolados de B.
cereus, MRSA (CIM de 0,66 mg/mL), ESBL e Shigella flexneri (CIM de 1,32 mg/mL). Ação
bactericida dos extratos foi obtida principalmente frente a bactérias Gram-positivas. Os teores
de eugenol detectados nos extratos de O. gratissimum não puderam ser correlacionados com a
atividade bacteriostática, o que sugere efeito sinérgico entre fito-constituintes. A maceração
foi considerada como a melhor metodologia para a obtenção de extratos etanólicos das partes
aéreas desta espécie. Os resultados de atividade antibacteriana confirmaram o teste de
toxicidade frente à Artemia salina L. como um método preditivo deste tipo de atividade.
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