Avaliação da produção de L- Asparaginase por fungos isolados do bioma Cerrado

• Main Author: Almeida, Renata Paula Coppini de
• Other Authors: Batista, Pérola de Oliveira Magalhães Dias
• Language: Portuguese
• Published: 2015
• Subjects: Fungos - Cerrados; Leucemia; Neoplasia; L-Asparaginase
• Online Access: http://repositorio.unb.br/handle/10482/18458; http://dx.doi.org/10.26512/2015.03.D.18458

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2015. === Submitted by Ana Cristina Barbosa da Silva ([e-mail]) on 2015-07-08T14:33:33Z No. of bitstreams: 1 2015_RenataPaulaCoppinideAlmeida.pdf: 1664573 bytes, checksum: 51ea0723acf2145b26ea30df349b2848 (MD5) === Approved for entry into archive by Raquel Viana([e-mail]) on 2015-07-17T14:06:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2015_RenataPaulaCoppinideAlmeida.pdf: 1664573 bytes, checksum: 51ea0723acf2145b26ea30df349b2848 (MD5) === Made available in DSpace on 2015-07-17T14:06:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2015_RenataPaulaCoppinideAlmeida.pdf: 1664573 bytes, checksum: 51ea0723acf2145b26ea30df349b2848 (MD5) === A leucemia linfóide aguda (LLA) é uma neoplasia maligna de linfócitos, caracterizada pelo acúmulo de células sanguíneas imaturas na medula óssea. Um dos medicamentos utilizados no tratamento da LLA é a enzima L-Asparaginase. Algumas linhagens de células tumorais não são capazes de produzir asparagina, assim, a redução dos níveis plasmáticos do aminoácido implica na inibição da síntese de proteínas das células leucêmicas. Atualmente, estão disponíveis apenas enzimas de origem bacteriana para serem utilizadas na clínica, o que reflete na grande taxa de efeitos adversos relacionados ao tratamento. Neste sentido, a busca por novas fontes de L-Asparaginase torna-se imprescindível. O presente trabalho teve como objetivo principal avaliar a produção de L-Asparaginase por fungos filamentosos isolados do bioma Cerrado brasileiro. Inicialmente, foi realizada a padronização do preparo da amostra e da metodologia para determinação da atividade enzimática, onde foram utilizadas a enzima padrão (Sigma-Aldrich) e a cepa de um conhecido produtor de L-Asparaginase, o Aspergillus terreus. Posteriormente, foram isolados 42 cepas fúngicas a partir do bioma Cerrado brasileiro. Das 42 cepas isoladas, 22 apresentaram halo vermelho, o que pode indicar a produção de L-Asparaginase. Essas 22 espécies foram cultivadas em meio líquido e apenas 10 apresentaram resultados positivos para produção enzimática. Em seguida, as 3 melhores cepas produtoras foram cultivadas em diferentes condições de cultivo a fim de melhorar a produção de L-Asparaginase. Com relação às fontes de carbono, a utilização de glicose foi essencial para a produção enzimática. A L-Prolina parece ser a fonte de nitrogênio mais eficaz para que a produção de L-Asparaginase ocorra. Foram encontrados ainda, diferentes valores de pH ótimos de cultivo pelas diferentes cepas fúngicas. === Acute lymphoblastic leukemia (ALL) is a malignant neoplasm of lymphocytes, characterized by the accumulation of immature blood cells in the bone marrow. One of the drugs used in the treatment of ALL is L-Asparaginase enzyme. Some tumor cell lines are not capable of producing asparagine thus the reduction of plasma levels of amino acids involves the inhibition of protein synthesis of leukemic cells. Currently, the only enzymes available for use in the clinic are of bacterial origin, which reflects the high rate of adverse effects related to treatment. In this way, the search for new sources of L-Asparaginase becomes indispensable. This study is aimed at evaluating the production of L-Asparaginase by isolated filamentous fungi of the brazilian savanna biome. Initially, the standardization of sample preparation was performed as well as the methodology for determining the enzymatic activity where the standard enzyme (Sigma-Aldrich) and the Aspergillus terreus, which is a known L-Asparaginase strain producer, were used. Subsequently, 42 fungal strains from the brazilian savanna were isolated and a screening to assess the ability of the same for the production of L-Asparaginase was performed through the halo test. Out of the 42 isolated stains, 22 species showed red halo, which may indicate the production of L-Asparaginase. These 22 species were cultivated in the liquid medium under controlled agitation and temperature and only 10 were positive for enzyme production. Then, the top 3 producing strains were grown in different culture conditions to improve the production of L-Asparaginase. Regarding the carbon sources, glucose utilization was essential for enzyme production. L-Proline seems to be the most effective source of nitrogen for producing L-Asparaginase. In addition, were found different optimum pH values of the different fungal strains cultivation.