Produção, purificação, caracterização bioquimica e aplicações de lipase de geotrichum sp

• Main Author: Macedo, Gabriela Alves, 1971-
• Other Authors: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: [s.n.] 1995
• Subjects: Lipase
• Online Access: MACEDO, Gabriela Alves. Produção, purificação, caracterização bioquimica e aplicações de lipase de geotrichum sp. 1995. 121f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/256693>. Acesso em: 20 jul. 2018.; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/256693

Orientador: Glaucia Maria Pastore === Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos === Made available in DSpace on 2018-07-20T05:57:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Macedo_GabrielaAlves_M.pdf: 10244837 bytes, checksum: 57a05b7e6b10a10186d65d76fd3a6e09 (MD5) Previous issue date: 1995 === Resumo: Setecentas linhagens de leveduras foram isoladas de amostras de solo, frutas, água, resíduos industriais e testadas quanto à capacidade de hidrolisar glicerídeos através da produção de lipase extracelular. Destas linhagens, cinco foram pré selecionadas como produtoras de lipase. Foi encontrada uma linhagem identificada como Geotrichum sp que apresentou alta produção de lipase em meio de cultivo composto por 1.5 % de farinha de soja desengordurada, 1% de farinha de trigo, 3% de extrato de levedura, 0.2 % NH4NO3, quando incubada a 30 °C por 48 horas com agitação de 100 rpm. A lipase de Geotrichum sp hidrolisa preferencialmente ésteres de ácidos graxos de cadeia longa insaturada e não tem afinidade pelo substrato p-nitrofenil laurato. A lipase de Geotrichum sp foi purificada 16.5 vezes através de fracionamento com sulfato de amónio e Cromatografia em coluna de DEAE-Sephadex A-50. A enzima purificada foi caracterizada bioquimicamente verificando-se que possui duas subunidades de peso molecular estimado em 52000 e 57000, através de eletroforese vertical em gel SDS- poliacrilamida. A lipase de Geotrichum sp apresentou atividade ótima na faixa de pH 5 a 8 a 45°C. A atividade enzimática foi acrescida em 45% na presença de 1 mM MgS04 no sistema de reação. A enzima não sofreu ação inibitória na presença de p-cloromercuribenzoato quando pura. A esterificação enzimática de ácido graxo e glicerol pela lipase de Geotrichum sp foi examinada e verificou-se que a enzima catalisou a reação de esterificação de ácido oléico em glicerol, com incorporação de 63% do ácido oléico após 2 horas de reação a 40°C === Abstract: The screening of lipase producing yeasts was performed including 700 strains of microorganisms which were isolated from samples of soil, fruits, and industrial residues. It was found that five strains produced high activity of extra cellular lipase and one of them produced exceptionally higher lipase activity. This strain was identified as Geotrichum sp. The lipase from Geotrichum sp was produced by liquid fermentation in medium containing 1.5 % deflated soybean flour, 1% wheat flour, 3% yeast extract, 0.2 % NH4NO3, at 30°C for 2 days. The lipase from Geotrichum sp hydrolysed preferentialy esters of fatty acids with high insaturated chain and it did not hydrolysed the sinthetic substrate p-nitrophenil laurate. The lipase was purified by fractionation with ammonium sulfate and DEAE- Sephadex A-50 column cromatography.The purified lipase was characterized and was found that optimum pH and temperature were between 5-8, and 45°C, respectively. The enzyme activity increased by the presence of MgS04, 0.1mM and was not inhibited in the presence of enzyme nhibitors. Enzymatic esterification using glicerol and fatty acid by lipase from Geotrichum sp was also examined. It was found that reaction system esterified 63% triglyceride after 2 hours of reaction time at 40 °C. The enzyme was shown to be constituted by two subunits. The molecular weight of the subunits was estimate to be 52000 - 57000 daltons by SDS-poliacrylamide gel === Mestrado === Mestre em Ciência de Alimentos