A proteina PGC-1a modula a expressão de interleucina-10 no figado : avaliação da sua interação com os fatores de transcrição NFkB e C-MAF

• Main Author: Morari, Joseane, 1982-
• Other Authors: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: [s.n.] 2009
• Subjects: Interleucinas; Fígado; Fatores de transcrição; Interleukin; Liver; Transcription factors
• Online Access: MORARI, Joseane. A proteina PGC-1a modula a expressão de interleucina-10 no figado: avaliação da sua interação com os fatores de transcrição NFkB e C-MAF. 2009. 83 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/310359>. Acesso em: 12 ago. 2018.; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/310359

Orientador: Licio Augusto Velloso === Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas === Made available in DSpace on 2018-08-13T01:56:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Morari_Joseane_M.pdf: 1671782 bytes, checksum: ebca1c2f8d19c88433316cd9134da3a3 (MD5) Previous issue date: 2009 === Resumo: Insuficiência hepática causada por cirrose decorrente da progressão da esteato-hepatite não alcoólica é hoje uma das principais indicações para transplante hepático no mundo. A ingestão de dietas ricas em lípides é uma das principais causas de esteato-hepatite não alcoólica, e, uma vez estabelecida, poderá ou não evoluir para cirrose, dependendo da ativação de uma resposta inflamatória local. Nem todos os indivíduos que desenvolvem esteatose progridem para a esteato-hepatite. Acredita-se que, dentre os fatores que desempenham papel protetor na progressão para a esteato-hepatite e, por conseguinte, para a cirrose, encontra-se o equilíbrio entre a expressão de citocinas pró- e anti-inflamatórias no fígado. Níveis locais elevados da citocina anti-inflamatória IL-10 reduzem a resistência hepática à insulina e diminuem o risco de desenvolvimento de esteato-hepatite. Em estudos recentes observamos que a inibição da atividade da IL-10 em um modelo animal de esteato-hepatite induzida por dieta contribui para a piora da disfunção hepática. Por outro lado, a redução da expressão do co-ativador de transcrição gênica PGC-1a reverte a esteatose hepática induzida por dieta. Tal reversão é acompanhada pela modulação da expressão de IL-10 e de seu receptor, IL-10R. No presente estudo avaliamos se o PGC-1a?interage com dois fatores de transcrição que participam do controle da expressão de IL-10, c-Maf e NF?Bp50. Para tal utilizamos as técnicas de imunoblot, imunoprecipitação, imunocitoquímica, histologia convencional e imunoprecipitação de cromatina. Os nossos resultados revelam que o PGC-1a?se associa a ambos, c-Maf e p50, após estímulo por ácidos graxos saturados e insaturados. Tal associação ocorre em paralelo ao aumento da expressão de IL-10 e se acompanha da migração de todas as três proteínas de uma localização preferencialmente citosólica para o interior do núcleo de hepatócitos. Além disso, sob estímulo por ácidos graxos, as três proteínas se ligam ao DNA do promotor do gene da IL-10, numa região localizada entre as bases -493 e -254, antes do códon iniciador do gene. Pelo menos a associação de PGC-1a?com p-50 e a indução da expressão de IL-10 por ácidos graxos pode ser inibida pela pré-exposição de hepatócitos ao ácido acetil salicílico, um inibidor da enzima ativadora do NF?B. Portanto, PGC-1a?interage com dois fatores de transcrição e com o DNA da região promotora do gene da IL-10 e emerge como potencial regulador da expressão de IL-10 no fígado. === Abstract: Interleukin-10 (IL-10) is an endogenous factor that restrains hepatic insulin resistance in diet-induced steatosis. Reducing IL-10 expression increases pro-inflammatory activity in the steatotic liver and worsens insulin resistance. Because in diet-induced steatosis the transcriptional co-activator PGC-1a plays a central role in the dysfunctional hepatocytic activity, we hypothesized that at least part of PGC-1a activity could be mediated by its effect on the transcriptional control of IL-10 expression. Here, we used immunoblot, real-time PCR, immunocytochemistry and ChIP assay to investigate the role of PGC-1a in the control of IL-10 expression in hepatic cells. First, we show that in the intact steatotic liver, the expressions of IL-10 and PGC-1a are increased. Inhibiting PGC-1a expression by antisense oligonucleotide increases IL-10 expression and reduces the steatotic phenotype. In cultured hepatocytes the treatment with saturated and unsaturated fatty acids, increase IL-10 expression. This is accompanied by increased association of PGC-1a with c-Maf and p50-NF?B, two transcription factors known to modulate IL-10 expression. In addition, following fatty acid treatment PGC-1a, c-Maf and p50- NF?B migrate from the cytosol to the nuclei of hepatocytes and bind to the IL-10 promoter region. Inhibiting NF?B activation with salicylate reduces IL-10 expression and PGC-1a association with p50-NF?B. Thus, PGC-1a emerges as a potential transcriptional regulator of the inflammatory phenomenon taking place in the steatotic liver. === Mestrado === Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento === Mestre em Fisiopatologia Médica