Purificação e caracterização de fosfatase acida da semente de mamona (Ricinus communis)

• Main Author: Granjeiro, Paulo Afonso
• Other Authors: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: [s.n.] 1998
• Subjects: Enzimas; Plantas; Cinetica de enzimas
• Online Access: GRANJEIRO, Paulo Afonso. Purificação e caracterização de fosfatase acida da semente de mamona (Ricinus communis). 1998. 83 f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/314316>. Acesso em: 23 jul. 2018.; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/314316

Orientador: Hiroshi Aoyama === Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia === Made available in DSpace on 2018-07-23T11:54:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Granjeiro_PauloAfonso_M.pdf: 8647747 bytes, checksum: 47be6cdbf5a900e8e754d15d8476beeb (MD5) Previous issue date: 1998 === Resumo: A fração AP1 da Fosfatase Ácida (E.C. 3.1.3.2.) foi detectada e parcialmente purificada de sementes de mamona (Ricinus communis ) através de colunas cromatográficas como SP-Sephadex, DEAE-Sephadex, Sephacryl S-200 e Concanavalina A Sepharose 4B. A enzima foi purificada até a homogeneidade 2.100 vezes, com atividade específica de 230 mmol min-1. A massa molecular relativa, determinada através de coluna Shim pack diol150 (Shimadzu HPLC), foi de 60 KDa. A fração AP1 apresenta uma porção de carboidrato na estrutura proteica e se liga a resina de Concanavalina A Sepharose 4B. A fração revela apenas uma banda difusa de atividade por eletroforese em condições não desnaturantes pH 8,3. As propriedades cinéticas da fosfatase ácida de sementes de mamona foram estudadas e a enzima apresentou alta atividade em pH 5,5. O valor da Km de 0,52 mM foi determinado utilizando p-nitrofenilfosfato como substrato em pH 5,5 a 37°C. Usando o pNPP como substrato, nenhum efeito na atividade fosfatásica foi observado na presença de EDTA, DTT b3-mercaptoetanol. Porém a atividade enzimática foi inibida por fosfato inorgânico, fluoreto, molibdato, vanadato, CU2+ e Zn2+. A fosfatase ácida de sementes de mamona não catalisou reações de transfosforilação devido não se ter observado nenhuma estimulação da atividade enzimática utilizando aceptores de fosfato, como glicerol, metanol e etanol === Abstract: The acid phosphatase (E.C. 3.1.3.2) AP1 form has been detected and partially purified from castor bean (Ricinus communis) seeds through SP-Sephadex, DEAE-Sephadex, Sephacry1 S-200 and Concanavalin. A chromatographies. The enzyme was purified to homogenity 2,100-fold, with a specific activity of 230 mmol min-1 . Relative molecular mass, determined by Shim pack diol150 column (Shimadzu HPLC), was found to be 60 KDa. AP1 presented a carbohydrate moiety in its proteic structure and binds to concanavalin A Sepharose. The fraction revealed a single phosphatase activity diffuse band on nondenaturing polyacrylamide gel electrophoresis, at pH 8.3. The acid phosphatase purified from castor bean seeds studied here presented a high activity at pH 5.5. An apparent Km of 0.52 mM was found for p nitrophenylphosphate, at pH 5.5 and 37°C. Using pNPP as substrate, no effect was observed on the acid phosphatase activity in the presence of EDT A, dithiothreitol, and b-mercaptoethanol. The enzyme was inhibited by inorganic phosphate, fluoride, vanadate, molybdate, CU2+ and Zn2+. The castor bean seeds acid phosphatase did not catalyze the transphosphorylation reaction since no stimulation was observed with inorganic phosphate acceptors, such as glycerol, methanol and ethanol === Mestrado === Bioquimica === Mestre em Ciências Biológicas