Pneumovirus aviario (PVA): detecção por RT-PCR quimioluninescente e caracterização dos isolados brasileiros por analise com enzimas de restrição e sequenciamento

• Main Author: Dani, Maria Angela Gomes de Castro
• Other Authors: UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: [s.n.] 1998
• Subjects: Virologia; Biologia molecular; Reação em cadeia da polimerase
• Online Access: DANI, Maria Angela Gomes de Castro. Pneumovirus aviario (PVA): detecção por RT-PCR quimioluninescente e caracterização dos isolados brasileiros por analise com enzimas de restrição e sequenciamento. 1998. 71f. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.repositorio.unicamp.br/handle/REPOSIP/316618>. Acesso em: 23 jul. 2018.; http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/316618

Orientador: Clarice Weis Arns === Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia === Made available in DSpace on 2018-07-23T20:36:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dani_MariaAngelaGomesdeCastro_M.pdf: 3584513 bytes, checksum: 44f0c60386e93a6a79298e7ba5df2fba (MD5) Previous issue date: 1998 === Resumo: Pneumovírus aviário (PVA) causa infecção aguda no trato respiratório em perus (rinotraqueítedos perus) e galinhas (síndrome da cabeça inchada) com início abrupto e disseminação rápida. Neste estudo, foi padronizada a reação de RT-PCR quimioluminescente para detecção de um transcrito do gene F do PVA em dois isolados europeus e dois isolados brasileiros. Foram realizadas PCRs de diluição limitante utilizando-se RT-PCR quimioluminescente e "nested PCR" (nPCR) para a comparação quanto à sensibilidade e especificidade entre as metodologias na detecção de PVA. A sensibilidade e especificidade da RT-PCR quimioluminescente foram semelhantes às da nPCR e 100 vezes mais sensível que uma única PCR. O seqüênciamento dos produtos de 175 pb do gene F revelaram 100% de homologia com seqüências depositadas no banco de dados. Em seguida foi realizada a caracterização dos isolados brasileiros através de RT-PCR, análise com enzimas de restrição e seqüênciamento automático de um fragmento do gene G. Os produtos de 600 pb correspondentes aos primeiros 600 nucleotídeos do gene G dos isolados SHS BR 119 e SHS BR 121 revelaram 99% de similaridade com 3 isolados do subgrupo A e 87% de similaridade com isolados do subgrupo B depositadas no banco de dados === Abstract: Avian Pneumovirus (APV) causes an acute respiratory tract infection both in turkeys (turkey rhinotracheitis) and chicken (swollen head syndrome) with sudden onset and rapid spread through the flocks. In this study, immunochemiluminescent Southern blot RT-PCR assay was employed to detect a F gene transcript of the avian pneumovirus (APV) in two European turkey isolates and two Brazilian chicken isolates. Limiting dilution PCR was performed to compare the sensitivity of immunochemiluminescent Southern blot assay and nested PCR (nPCR) assay. The sensitivity and specificity of immunochemiluminescent Southem blot RT-PCR assay were comparable to that of nPCR, and at least 100 fold more sensitive than a single PCR amplification. Sequence analysis of the 175 bp product ofthe F gene revealed 100% identity with earlier reported PVA sequences. We characterized the Brazilian isolates using restriction analysis and sequencing of a 600 bp fragment of the G gene and conclude that the isolates belong to the APV subgroup A === Mestrado === Microbiologia === Mestre em Ciências Biológicas