Perfis de ácidos graxos em isolados de Leishmania spp. com resistência natural ao óxido nítrico e ao trivalente

• Main Author: Azevedo, Alana Freire de
• Other Authors: Fernandes, Roberta Pereira Miranda
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Federal de Sergipe 2017
• Subjects: Biotecnologia; Leishmania; Leishmaniose; Ácidos graxos; Esteres; Leishmania chagasi; Leishmania amazonensis; FAMEs; Leishamania amazonensis; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS
• Online Access: https://ri.ufs.br/handle/riufs/3287

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior === Fatty acids, especially those from phospholipids (PLFA), are essential membrane components, present in a relatively constant proportion in the biological membranes under natural conditions. However, under harmful growth conditions such as diseases, environmental changes and chemical exposure, the proportion of lipids may vary. Once these changes could be identified and revel to be specific for such adverse situation, it could be used as a biomarker. Thus, the biomarkers can help, for example, to identify a virulence and resistance mechanism to a particular chemotherapeutic agent. Therefore, to make treatment more effective, a specific biomarker could lead to a better therapeutic decision, regarding candidate drugs and their indications. The objective of this study was to compare the fatty acid profiles of L. chagasi and L. amazonesis isolates resistant and sensitive to antimony (Glucantime ®) and to nitric oxide (NO). We studied 2 isolates of L. amazonensis and 8 of L. chagasi. Total lipids were extracted from lyophilized promastigotes forms in late logarithmic growth phase (50 mL; 5x108/mL cells). Fatty acid methyl esters (FAMEs) were obtained from total lipids, ester-linked lipids and ester-linked phospholipids by MIDI, ELFA and PLFA techniques respectively. FAMEs were analyzed by chromatography and mass spectrometry. Differences in FAME profiles associated with species or resistance were assessed by non-metric multidimensional scaling, multiresponse permutation procedures and indicator species analyses using PC-ORD 6.0. Previously to these analyses, molar masses of individual FAMEs were relativized by FAMEs totals within each sample. Isolates resistant and sensitive to NO and antimony had different MIDI-FAME profiles, regardless the species. However, neither ELFA nor PLFA profiles differed between sensitive and resistant isolates. The fatty acid 18:1 δ9c was increased in sensitive isolates (p<0,001), whereas an yet unidentified peak showed the opposite trend (p<0,01). We can conclude that these two fatty acids are potential biomarkers for NO and antimony resistance in L. chagasi and L. amazonesis and they can be helpful for therapeutical diagnosis. === Acidos graxos, especialmente aqueles de fosfolipideos (PLFA), sao componentes essenciais das membranas biologicas que estao em proporcao relativamente constante em condicoes naturais. No entanto, sob condicoes adversas de crescimento, como doencas, mudancas ambientais e exposicao a substancias quimicas, pode ocorrer uma variacao na proporcao dos lipideos. A identificacao destas modificacoes especificas pode revelar um biomarcador. Assim, os biomarcadores podem ajudar, por exemplo, na identificacao de um mecanismo de virulencia e de resistencia a um agente quimioterapico particular. Portanto, um biomarcador especifico pode levar a uma melhor decisao terapeutica, a respeito da indicacao e escolha de drogas, tornando o tratamento mais eficaz. O objetivo deste estudo foi comparar os perfis de acidos graxos de L. chagasi e L. amazonesis em isolados resistentes e sensiveis a antimonio (Glucantime R) e oxido nitrico (NO). Os lipidios totais foram extraidos a partir de formas promastigotas liofilizadas em fase tardia de crescimento logaritmico (50 mL celulas 5x108/mL). Foram estudados 2 isolados de L. amazonensis e 8 de L. chagasi. Os esteres metilicos de acidos graxos (FAMEs) foram obtidos a partir de lipideos totais, lipideos e fosfolipideos ester ligados, respectivamente, pelas tecnicas MIDI, ELFA e PLFA. Os FAMEs foram analisados por espectrometria de massa e cromatografia gasosa. Diferencas nos perfis de acidos graxos associadas a especies ou resistencia foram avaliadas por escalonamento multidimensional nao metrico, procedimentos de permutacao de respostas multiplas e analises indicadoras de especies, usando o PC-ORD 6.0. Anteriormente a essas analises, as massas molares individuais dos FAMEs foram relativizadas por FAMEs totais dentro de cada amostra. Os isolados resistentes e sensiveis ao NO e ao antimonio apresentaram diferentes perfis FAME-MIDI, independentemente da especie. No entanto, os perfis de ELFA e PLFA nao diferiram entre os isolados sensiveis e resistentes. O acido graxo 18:1 Â9c foi aumentado em isolados sensiveis (p <0,001), ao passo que um pico ainda nao identificado mostrou a tendencia oposta (p <0,01). Assim, podemos concluir que esses dois acidos graxos sao potenciais biomarcadores para sensibilidade e resistencia ao NO e ao antimonio em L. chagasi e L. amazonesis e podem ajudar no diagnostico terapeutico.