Avaliação funcional e morfológica do músculo estriado esquelético e junções neuromusculares em ratos submetidos a um modelo de paralisia cerebral

• Main Author: Buratti, Pâmela
• Other Authors: Torrejais, Marcia Miranda
• Format: Others
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual do Oeste do Paraná 2018
• Subjects: Lipopolissacarídeo; Anóxia perinatal; Restrição sensório-motora; Morfologia; Morfometria; Morphometry; Lipopolysaccharide; Perinatal anoxia; Sensorimotor restriction; Morphology; CIENCIAS BIOLOGICAS
• Online Access: http://tede.unioeste.br/handle/tede/3424

Submitted by Edineia Teixeira ([e-mail]) on 2018-02-26T14:14:15Z No. of bitstreams: 2 Pâmela_Buratti2017.pdf: 1971935 bytes, checksum: 016f66981771eed7ce5ec50ed236c207 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) === Made available in DSpace on 2018-02-26T14:14:15Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Pâmela_Buratti2017.pdf: 1971935 bytes, checksum: 016f66981771eed7ce5ec50ed236c207 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2017-05-05 === Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES === Cerebral palsy (CP) corresponds to a motor disorder, caused by non-progressive injury in the immature brain, resulting in changes in muscle tone, movement and postureThis study aimed to investigate the morphofunctional characteristics of the plantar muscle in an animal model of CP. To obtain the litters were used for paired adult Wistar rats (11 females and 06 males). The pregnant females were separated in: rats injected intraperitoneally with vehicle (100 μL of sterile saline) and rats injected intraperitoneally with lipopolysaccharide (LPS; 200 μg / kg LPS in 100 μL sterile saline). The injections were performed every 12 hours, from the 17th gestational day until the end of gestation (21st gestational Day). The male offspring were separated in: Control group (CG, n = 8) - pups of rats injected with saline solution during pregnancy, and CP group (CPG, n = 8) - pups of rats injected with LPS during pregnancy, submitted to perinatal anoxia and sensorimotor restriction. For perinatal anoxia, the pups were placed in a closed chamber, partially immersed in water at 37 °C ± 1, with a flow of 9 L/min of nitrogen (100%) for 20 minutes on the day of birth (postnatal day 0, P0). From the 1st to the 30th postnatal day (P1 to P30), the CPG animals were submitted to sensorimotor restriction for 16 hours/day. At 29 and 45 days of age, the animals were evaluated in the open-field test, being collected time of displacement, crossing, rearing and grooming frequency. At the 48th postnatal day the animals were weighed and the collection, measurement of weight and muscle length were performed. The muscle fibers were evaluated in histological sections submitted to Hematoxylin-Eosin (HE), NADH-TR reaction (Nicotinamide Adenine Dinucleotide - Tetrazolium Redutase) and transmission electron microscopy; intramuscular collagen was studied with Masson's trichrome staining; and the neuromuscular junctions (NMJs) ascertained by the Nonspecific Esterase reaction. The data were statistically evaluated using the parametric Student t-test and the non-parametric Mann-Whitney test, according to the Kolmogorov-Smirnov normality test.It was verified that when compared to CG the CPG presented: reduction in time of displacement, number of crosses and rearing at 29 days of age; in the time of displacement and rearing at 45 days of age; of body parameters (body weight, weight and length soleus muscle); of the nuclei/fiber and capillary/fiber relations; increased percentage of collagen; reduction of cross-sectional area of muscle fibers type I; increased counts of fibers type I; in the number of myofibrillar disorganization, of the Z line and dissolution of the Z line; and reduction in area, larger and smaller diameters of NMJs. It is concluded that the PC model used altered the morphological characteristics of the skeletal striated muscle, causing deficits in the locomotor activity of the animals, as evidenced by the results of the evaluation in the open field. === A paralisia cerebral (PC) corresponde a uma desordem motora, ocasionada por lesão não progressiva no cérebro imaturo, por conseguinte, acarreta alterações no tônus muscular, movimento e postura. Este estudo objetivou investigar as características morfofuncionais do músculo plantar em um modelo animal de PC. Na obtenção das ninhadas, ratos Wistar adultos foram utilizados para o pareamento (11 fêmeas e 06 machos) e as fêmeas prenhas foram agrupadas em: ratas injetadas intraperitonealmente com veículo (100 μL de solução salina estéril); e ratas injetadas intraperitonealmente com lipopolissacarídeo (LPS; 200 μg/kg de LPS em 100 μL de solução salina estéril), a cada 12 horas, a partir do 17º dia gestacional até o final da gestação (21º dia gestacional). Os filhotes machos foram separados em: Grupo controle (GC, n= 8), filhotes de mães injetadas com solução salina durante a gestação; e Grupo PC (GPC, n = 8), filhotes de mães injetadas com LPS na gestação, submetidos à anóxia perinatal e restrição sensório-motora. Para a anóxia perinatal, os filhotes foram colocados em uma câmara fechada, parcialmente imersa em água a 37°C±1, com fluxo de 9 L/min de nitrogênio (100%) durante 20 minutos no dia do nascimento (dia pós-natal 0, P0). Do 1º ao 30º dia pós-natal (P1 até P30), os animais do GPC foram submetidos à restrição sensório-motora durante 16 horas/dia. E, aos 29 e 45 dias de vida, os animais foram avaliados no teste de campo aberto, coletados os dados de tempo de deslocamento, cruzamento, frequências de erguidas (rearing) e de autolimpeza (grooming). No 48º dia pós-natal, os animais foram pesados e foi realizada a coleta, além das mensurações do peso e do comprimento muscular. As fibras musculares foram avaliadas em secções histológicas submetidas às técnicas de Hematoxilina-Eosina (HE), reação da NADH-TR (Nicotinamida Adenina Dinucleotídeo – Tetrazolium Redutase) e microscopia eletrônica de transmissão. O colágeno intramuscular foi estudado com a coloração de Tricrômico de Masson e as junções neuromusculares (JNMs) foram averiguadas pela reação Esterase Inespecífica. Os dados foram avaliados estatisticamente com o teste paramétrico t de Student e teste não paramétrico Mann-Whitney, de acordo com o teste de normalidade Kolmogorov-Smirnov. Verificou-se que, quando comparado ao GC, o GPC apresentou: redução significativa no tempo de deslocamento, no número de cruzamentos e no rearing aos 29 dias de idade; no tempo de deslocamento e no rearing aos 45 dias de idade; nos parâmetros corporais (peso corporal, peso e comprimento do músculo sóleo); nas relações núcleo/fibra e capilar/fibra; aumento na porcentagem de colágeno; redução da área de secção transversal das fibras musculares tipo I; aumento na contagem de fibras do tipo I; no número de desorganização miofibrilar, da linha Z e dissolução da linha Z; e redução na área, diâmetros maior e menor das JNMs. Conclui-se, portanto, que o modelo de PC utilizado alterou as características morfológicas do músculo estriado esquelético e causou déficits na atividade locomotora dos animas, comprovado pelos resultados da avaliação em campo aberto.