Comparação morfofuncional de folículos com um ou mais oócitos em ovários ovinos (Ovis aries)

• Main Author: Reginaldo Luís Oliveira
• Other Authors: Marcelo Marcondes Seneda .
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. 2014
• Online Access: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000192431

O objetivo do presente estudo foi avaliar a morfologia e atividade proliferativa de folículos com um oócito e folículos com mais de um oócito (multioócitos - MOFs) em ovários de ovinos. Para tanto, foram utilizados 32 pares de ovários de ovelhas oriundas de abatedouro local. No momento da colheita, os ovários foram avaliados macroscopicamente (estimativa da população folicular antral, presença de corpos lúteos), mensurados, pesados e fixados em solução de formalina tamponada a 10%. No primeiro experimento foi realizada a avaliação das características morfológicas e morfométricas dos folículos ovarianos nos diferentes estágios de desenvolvimento, através da análise de lâminas histológicas coradas pelo Ácido Periódico de Schiff (PAS). As lâminas foram analisadas e os folículos classificados e mensurados através de programa de análise de imagens MOTICplus ®. Obteve-se os seguintes diâmetros médios para folículos e oócitos: primordiais, 30,96 ± 4,6&#956;m e 25,09 ± 1,61&#956;m; primordiais multioócitos (MOFs), 48,62 ± 5,66&#956;m e 24,31 ± 3,35&#956;m; primários, 50,96 ± 8,52&#956;m e 34,42 ± 4,50&#956;m; secundários, 86,48 ± 21,85&#956;m e 49,01 ± 11,49&#956;m; antrais, 226,26 ± 69,93&#956;m e 66,26 ± 11,01&#956;m. Através do teste de Wilcoxon para amostras dependentes foi evidenciado que o diâmetro dos oócitos de MOFs primordiais comparado aos oócitos de folículos com um oócito, no mesmo estágio de desenvolvimento, não foi significativo. MOFs foram observados em maior quantidade que os folículos secundários, não havendo diferença significativa quanto à sua prevalência entre os ovários direito e esquerdo. Os dados macroscópicos foram analisados através do teste de correlação de Spearman e mostraram correlação significativa da população folicular média em relação ao diâmetro médio ovariano (p<0,01), ao peso médio ovariano (p<0,05) e ao volume médio ovariano (p<0,05). O número total de MOFs não apresentou correlações significativas com as demais variáveis, entretanto mostrou uma correlação próxima da significância com a população média folicular (p=0,056). No segundo experimento, as amostras foram processadas e submetidas à avaliação imuno-histoquímica para os anticorpos anti- PCNA e anti-Ki-67 e a análise foi realizada através de score histológico. Após verificado a ausência de normalidade e homocedasticidade os dados imunohistoquímicos foram analisados através do teste de Wilcoxon para amostras dependentes. A imunoexpressão para PCNA foi presente em todos os estagios do desenvolvimento folicular, não apresentando diferença significativa entre os folículos contendo um oócito e MOFs primordiais. Em relação à imunoexpressão de Ki-67, não foi observado imunomarcação positiva para os folículos com um oócito e MOFs primordiais, porém, em todos os outros estágios de desenvolvimento observou-se imunomarcação positiva, tanto para folículos com um oócito, quanto para multioócitos. Os resultados obtidos através de avaliação morfométrica e imunohistoquímica sugerem que folículos primordiais MOFs apresentam morfologia e atividade semelhantes aos folículos primordiais com um oócito, existindo a possibilidade de desenvolverem-se normalmente. === The aim of this study was to evaluate the morphology and proliferative activity of follicles with an oocyte and follicles with more than one oocyte (multioocytes - MOFs) in ovaries of sheep. To this end, 32 pairs of ovaries from sheep originating from a local slaughterhouse were used. At harvest, the ovaries were macroscopically evaluated (estimated antral follicular population, presence of corpora lutea), measured, weighed and fixed in formalin buffered at 10%. In the first experiment the evaluation of morphological and morphometric characteristics of ovarian follicles was performed in different stages of development, through the analysis of histological slides stained by Periodic Acid Schiff (PAS). Slides were analyzed and classified and measured follicles through image analysis MOTICplus ® program. We obtained the following average diameters follicles and oocytes: primordial, 30,96 ± 4,6&#956;m and 25,09 ± 1,61&#956;m; primordial multioocytes ( MOFs ) 48,62 ± 5,66&#956;m and 24,31 ± 3,35&#956;m; primary, 50,96 ± 8,52&#956;m and 34,42 ± 4,50 &#956;m; secundary, 86,48 ± 21,85 &#956;m and 49,01 ± 11,49 &#956;m; antral, 226,26 ± 69,93&#956;m and 66,26 ± 11,01&#956;m. Using the Wilcoxon test for dependent samples was shown that the diameter of MOFs primordial oocytes compared to oocytes from follicles with an oocyte in the same stage of development, was not significant. MOFs were found in greater quantity than the secondary follicles, with no significant difference in prevalence between the right and left ovaries. Macroscopic data were analyzed using the Spearman correlation test showed significant correlation and average follicular population in relation to the average ovarian diameter (p < 0,01), the average ovarian weight (p < 0,05) and average ovarian volume (p < 0,05). The total number of MOFs showed no significant correlations with the other variables, however showed a close correlation with the significance of follicular average population (p = 0,056). In the second experiment, the samples were processed and subjected to immunohistochemical evaluation for anti-PCNA and anti-Ki-67 and analysis was performed by histological score. After verified the absence of normality and homoscedasticity immunohistochemical data were analyzed using the Wilcoxon test for dependent samples. The immunostaining for PCNA was present in all stages of follicular development, no significant difference between the follicles containing an oocyte and primordial MOFs. In relation to the immune Ki-67, no positive immunostaining was observed for follicles with an oocyte and primordial MOFs, but in all other stages of development observed positive immunostaining for both follicles with an oocyte, and for multioocytes. The results obtained from morphometric and immunohistochemical evaluation suggest that primordial follicles MOFs exhibit similar morphology and the primordial follicles with an oocyte activity, with the possibility to develop normally.