Estratégias para o controle de infecções causadas por Streptococcus agalactiae

• Main Author: Eliane Saori Otaguiri
• Other Authors: Sueli Fumie Yamada Ogatta .
• Language: Portuguese
• Published: Universidade Estadual de Londrina. Centro de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia. 2017
• Online Access: http://www.bibliotecadigital.uel.br/document/?code=vtls000218920

Streptococcus agalactiae ou estreptococos do grupo B (EGB) de Lancefield continua sendo uma das principais causas de infecções invasivas e potencialmente fatais em recém-nascidos em todo o mundo, apesar da antibioticoterapia profilática intraparto (API). O objetivo principal deste estudo foi analisar estratégias alternativas para o controle de infecções neonatais por EGB. Inicialmente, um ensaio de multiplex PCR em tempo real baseado em curva de melting foi padronizado para detecção simultânea de EGB e marcadores de resistência a macrolídeos e lincosamidas diretamente de swab vaginal-retal. Oligonucleotídeos iniciadores específicos e complementares aos genes cfb (codifica para fator CAMP), erm(A) e erm(B) (codificam para metilases) e mef(A) (codifica para bomba de efluxo) foram desenhados a partir de sequências nucleotídicas de EGB depositadas em bancos de dados públicos. O ensaio de multiplex PCR apresentou 100% de especificidade e um limite de detecção de 104 unidades formadoras de colônias equivalentes por reação. A prevalência de colonização de EGB entre a população estudada foi de 15.7% (16/102) com base nos resultados de cultura positiva e do multiplex PCR em tempo real. Entre os isolados de EGB, somente dois apresentaram resistência aos antimicrobianos, tanto pelo método fenotípico quanto molecular. Também foi avaliado pela primeira vez o efeito do oleoresina obtido de Copaifera multijuga Hayne (óleo de copaíba) isoladamente ou em combinação com nanopartículas de prata produzidas metabólitos de Fusarium oxysporum (AgNPbio) contra célula planctônica e séssil de isolados de EGB. O óleo de copaíba apresentou atividade bactericida dose-dependente em células planctônicas de EGB, incluindo aqueles resistentes à eritromicina ou clindamicina. Análises de microscopia eletrônica de transmissão e varredura de células planctônicas tratadas com o óleo de copaíba apresentaram ruptura de parede celular com extravazamento de conteúdo citoplasmático. Este composto também apresentou atividade antibacteriana sobre biofilmes de EGB, inibindo sua formação, bem como a viabilidade de biofilmes maduros. Além disso, a combinação do óleo de copaíba com AgNPbio resultou em efeito sinérgico em células planctônicas e na formação de biofilme, reduzindo significativamente os valores de concentração inibitória mínima de ambos os compostos. Os resultados obtidos neste estudo mostram que a multiplex PCR em tempo real é um ensaio rápido, acessível e sensível, adequado para detecção direta de EGB e marcadores de resistência à eritromicina ou clindamicina diretamente em swabs vaginal-retal. Adicionalmente, revelam o potencial do óleo de copaíba, sozinho ou em combinação com AgNPbio, para o desenvolvimento de novas formulações farmacêuticas para o controle de colonização e infecções por EGB. === Streptococcus agalactiae or Lancefield's Group B streptococci (GBS) remains a major cause of invasive and life-threatening infections in newborns worldwide, despite intrapartum prophylactic antibiotic therapy (IAP). The aim of this study was to analyze alternative strategies for the control of neonatal infections due to GBS. Initially, a real-time PCR multiplex assay based on melting curve was standardized for simultaneous detection of GBS and resistance markers to macrolides and lincosamides directly from vaginal-rectal swab. Specific oligonucleotide primers complementary to the genes cfb (coding for CAMP factor), erm(A) and erm(B) (coding for methylases) and mef(A) (coding for efflux pump) were designed from nucleotide sequences of GBS deposited in public databases. The multiplex-PCR assay had a specificity of 100% and a detection limit of 104 colony forming units equivalent per reaction. The prevalence of GBS colonization among the studied population was 15.7% (16/102) based on the positive culture and the real time multiplex-PCR results. Among the GBS isolates, only two presented antimicrobial resistance, both by the phenotypic and molecular method. The effect of oleoresin obtained from Copaifera multijuga Hayne (copaiba oil) alone or in combination with silver nanoparticles produced by Fusarium oxysporum (AgNPbio) metabolites against planktonic and sessile cells of GBS isolates was also evaluated for the first time, in this study. Copaiba oil showed a dose-dependent bactericidal activity in planktonic cells of GBS, including those resistant to erythromycin or clindamycin. Transmission and scanning electron microscopy analysis of planktonic cells treated with copaiba oil presented disruption of cell wall and leakage of cytoplasmic content. This compound also presented antibacterial activity on GBS biofilms, inhibiting its formation, as well as the viability of mature biofilms. In addition, the combination of copaiba oil with AgNPbio resulted in a synergistic effect on planktonic cells and biofilm formation, significantly reducing the minimum inhibitory concentration values of both compounds. The results obtained in this study show that the real-time multiplex-PCR multiplex is a rapid, affordable and sensitive assay suitable for direct detection of GBS and antimicrobial resistance markers directly on vaginal-rectal swabs. Additionally, they reveal the potential of copaiba oil, alone or in combination with AgNPbio, for the development of new pharmaceutical formulations for the control of GBS colonization and infections.