Detecção de complexos clonais hipervirulentos de meningococos por PCR em tempo real

• Main Author: Sardinha, Guilherme Gonçalves
• Other Authors: Clementino, Maysa Beatriz Mandetta
• Language: Portuguese
• Published: 2015
• Subjects: Neisseria meningitidis; Reação em Cadeia da Polimerase; Vigilância Sanitária
• Online Access: https://www.arca.fiocruz.br/handle/icict/11150

Made available in DSpace on 2015-07-08T12:28:20Z (GMT). No. of bitstreams: 2 14.pdf: 2053160 bytes, checksum: 6a9f2af0a7daaa1f0f06673bc00622fc (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2013 === Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde === A doença meningocócica (DM) é uma enfermidade aguda, grave, de evolução rápida com taxas de mortalidade de 15 a 20% e que atinge principalmente as faixas etárias mais jovens, considerada um grave problema de saúde pública mesmo em países desenvolvidos. A DM está associada à colonização da nasofaringe de humanos, único hospedeiro, por uma bactéria Gram negativa, Neisseria meningitidis. O método considerado padrão ouro para a tipificação molecular da Neisseria meningitidis é o MLST, que consiste no sequenciamento de 7 genes Housekeeping , o MLST é uma técnica complexa que exige uma demanda de custo e tempo, tornando-se inviável sua implementação em laboratórios públicos que recebem amostras de Nm, uma estratégia que poderá contornar este obstáculo seria a PCR em tempo real que com poucas reações e em poucos dias fornecerá o perfil de MLST de isolados com alta porcentagem de confiabilidade. O objetivo do estudo é detectar os complexos clonais do MLST causadores dos grandes surtos de DM através de sondas específicas pela PCR em Tempo Real Qualitativa. A análise pelo MLST de 98 isolados estudados caracterizou todos os 15 isolados do sorogrupo B como integrantes do complexo clonal ST-32/ET-5 além de outras 11 cepas do sorogrupo C. O ST-103 foi o complexo clonal predominante entre as cepas do sorogrupo C com 43 isolados, outros STs foram encontrados para o sorogrupo C,ST-11 (n=11), ST-41/44 (n=2), ST-8/4A (n=9), ST-35 (n=1), ST-269 (n=1) e outros 5 isolados não foram associados a nenhum complexo clonal. A análise pela PCR em Tempo Real forneceu dados importantes como a caracterização de grande número dos isolados com 100% de certeza e de outros isolados com probabilidade acima de 75%. A PCR em Tempo Real qualitativa mostrou ser uma ferramenta rápida e sensível no auxílio a estudos epidemiológicos para controle de surtos regionais quando há a necessidade de ações rápidas por parte das autoridades de saúde pública. === Meningococcal disease (MD) is an acute illness, severe, rapidly evolving with mortality rates of 15 to 20% and that primarily affects younger age groups, considered a serious public health problem in developed countries. DM is associated with colonization of the nasopharynx of human host by Gram negative bacteria, Neisseria meningitidis (Nm). The method considered the "gold standard" for molecular typing of Neisseria meningitidis is the MLST, which consists in sequencing of 7 genes "Housekeeping", the MLST is a complex technique that requires a time and cost consuming, making it impractical implementation in public laboratories that receive Nm samples, a strategy that could circumvent this obstacle would be the real-time PCR with few reactions in a few days coud provide the MLST profile of isolates with a high percentage of reliability. The objective in this study is to detect the MLST clonal complexes causing major outbreaks of DM through specific probes for Real Time PCR Qualitative method. The analysis by MLST of 98 isolates studied featured all 15 isolates of serogroup B as clonal complex ST-32/ET-5 plus 11 other strains of serogroup C. The ST-103 was the predominant clonal complex among strains of serogroup C isolates with 43. Others STs were found for serogroup C, ST-11 (n=11), ST-41/44 (n=2), ST-8/4A (n=9), ST-35 (n=1), ST-269 (n=1) and other five isolates were not associated with any clonal complex. The analysis by Real Time PCR provided important data such as the characterization of large numbers of isolates with 100% certainty and other isolates with probability above 75%. The Real-Time PCR using the qualitative method proved to be a highly useful tool to aid in rapid and epidemiological studies for outbreak control is necessary when regional rapid actions of public health authorities.