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Previous issue date: 2016-02-23 === A reação reversa (RR) é um quadro súbito com lesões cutâneas e neurais agudas que interrompem o curso crônico da hanseníase. A RR pode ocorrer em qualquer momento da evolução clínica da doença, inclusive após cura bacteriológica, afetando tanto pacientes multibacilares como paucibacilares. É largamente aceito que mecanismos imunológicos estão envolvidos neste processo, entretanto, o papel da resposta imune adaptativa específica ao M. leprae na patogênese da RR ainda não está esclarecido, já que ocorre em pacientes hiporrespondedores. No presente estudo caracterizamos as subpopulações de linfócitos T sanguíneos ex vivo envolvidas na RR assim como suas atividades funcionais in vitro. Para tanto, analisamos pacientes multibacilares com a forma clínica Borderline Lepromatosa (BL) que desenvolveram pela primeira vez a RR. Pacientes BL não reacionais e controles sadios de área endêmica para a hanseníase também foram incluídos no estudo. As análises fenotípica e funcionais ex vivo e in vitro foram realizadas por meio de citometria de fluxo multiparamétrica. Para os ensaios in vitro, as células mononucleares de sangue periférico (PBMC) dos pacientes foram cultivadas e estimuladas com M. leprae (ML, 20\F06Dg/mL) e enterotoxina B de Staphyilococcus aureus (SEB, 1\F06Dg/mL) por 6 horas
Para detectar a resposta proliferativa, as células foram incubadas com carboxifluoresceína diacetato succinimidil éster (CFSE) e estimuladas com ML e SEB por 5 dias. A análise dos genes que codificam os fatores de transcrição críticos para a diferenciação de linfócitos T foi realizada por reação da polimerase em cadeia quantitativa em tempo real (qRT-PCR). Os resultados obtidos em nosso estudo sugerem que na abertura da RR, stat4 e t-bet são preferencialmente expressos in vivo. Observamos ainda diminuição ex vivo na frequência de linfócitos TNAÏVE no grupo RR e a prevalência nesses pacientes de células TEF e de memória previamente ativadas. As mesmas observações e conclusões podem ser aplicadas no que concerne à resposta proliferativa, vez que linfócitos T CD4+ e CD8+ do grupo RR proliferam in vitro espontaneamente e em resposta ao M. leprae. As células produtoras de IFN-\F067 foram observadas em todas as subpopulações de linfócitos T do grupo RR, incluindo TNAÏVE. No grupo RR também observamos frequências aumentadas de células TEF, TCM e TEM CD4+ e CD8+ produtoras de TNF\F02E\F020Além disso, nas mesmas condições, observamos frequência significativa de células TEF produtoras de IL-10. Em conjunto, os dados aqui apresentados e discutidos sugerem ativação Th1 in vivo como fator preponderante na patogênese da RR em pacientes BL === R
eversal reaction (RR) is a sudden acute cutaneous and neural
manifestation with
lesions, that
interrupt the chronic course of lepros
y. RR can occur at any time during
the clinical course of the disease, even after bacteriological cure, affecting both
multibacillary and paucibacillary patients. It is widely accepted that immune
mechanisms are involved in this process; however, the role
of specific adaptive
immune response to
M. leprae
in the RR pathogenesis is not clear, since it occurs in
hyporesponsive patients. In the present study
,
we characterize
ex vivo
blood
T
lymphocytes
subsets
involved in RR
,
as well as their
in vitro
functiona
l activities.
For
such purpose
, we analyzed BL patients which developed RR. Non reactional BL
patients and healthy individuals from endemic leprosy area were also included in the
study. Phenotypic and functional
ex vivo
and
in vitro
analyzes were performed
by
multiparametric flow cytometry. For
in vitro
assays,
peripheral blood mononuclear cells
(
PBMC
)
were cultured and stimulated with
M. leprae
(ML, 20
g/mL) and
Staphylococcus aureus
entertoxin B (
SEB
,
1
g/mL) for 6 hours. To detect the
proliferative response, PBMC incubated with
carboxyfluorescein succinimidyl ester
(
CFSE
)
were stimulated with ML or SEB for 5 days. The analysis of the transcription
factors
i
nvolved
in
T cell differentiation was performed
by quantitative
r
eal
-
t
ime
polymerase chain reaction
(qRT
-
PCR
)
.
The results obtained from our study suggest
that, at RR onset,
stat4
and
t
-
bet
are preferentially expressed
in vivo
. Among RR
patients, we still observed an
ex vivo
decrease in the frequency of
T
NAIVE
lymphocytes,
as well as the prevalence of T
EF
and previously activated memory cells. The same
remarks ad conclusions may be applied to the proliferative response, as T CD4+ and
C
D
8+ lymphocytes proliferate
in vitro
, both spontaneously and in
response to
M.
leprae
. IFN
-
producing cells were observed in all T lymphocytes subsets in RR,
including T
NAIVE
.
Among RR patients, we also noted an increased frequency of TNF
producing
T
EF
, T
CM
and
T
EM
CD4+
and
CD8+
cells. Moreover, under the same
conditi
ons, we observed a significant frequency of IL
-
10 producing T
EF
cells. Taken
together, the data submitted and discussed herein suggest in vivo Th1 activation as a
predominant factor in the pathogenesis of RR among BL patients
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