Caractérisation du système CRISPR-cas chez Streptococcus thermophilus
CRISPR : Clustered regularly interspaced short palindromic repeats === Streptococcus thermophilus est une bactérie utilisée pour la fabrication de produits laitiers fermentes, mais elle doit constamment lutter contre les infections par de nouveaux bacteriophages virulents. Récemment, un tout nouveau...
Main Author: | |
---|---|
Other Authors: | |
Format: | Dissertation |
Language: | French |
Published: |
Université Laval
2009
|
Subjects: | |
Online Access: | http://hdl.handle.net/20.500.11794/21000 |
id |
ndltd-LAVAL-oai-corpus.ulaval.ca-20.500.11794-21000 |
---|---|
record_format |
oai_dc |
spelling |
ndltd-LAVAL-oai-corpus.ulaval.ca-20.500.11794-210002020-07-25T05:09:07Z Caractérisation du système CRISPR-cas chez Streptococcus thermophilus Caractérisation du système Clustered regularly interspaced short palindromic repeats-cas chez Streptococcus thermophilus Garneau, Josiane Moineau, Sylvain Streptococcus salivarius Bactériophages Acides nucléiques -- Séquences répétées CRISPR : Clustered regularly interspaced short palindromic repeats Streptococcus thermophilus est une bactérie utilisée pour la fabrication de produits laitiers fermentes, mais elle doit constamment lutter contre les infections par de nouveaux bacteriophages virulents. Récemment, un tout nouveau mécanisme naturel de défense contre les phages a été découvert chez S. thermophilus. Les CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats) sont des séquences d'ADN contenant plusieurs répétitions entrecoupées de régions appelées spacers qui proviennent d'ADN extrachromosomique. Les loci CRISPR sont habituellement situés à proximité de gènes cas (CRISPR-associated). L'acquisition d'un spacer est directement reliée à une immunité contre le phage duquel provient l'ADN de ce spacer. Au cours de ce projet de maîtrise, le mode de fonctionnement du système CRISPR-cas a été étudié par analyse transcriptionnelle des gènes cas, de régions impliquées dans le locus CRISPRl-cas ainsi que des gènes viraux chez trois souches isogéniques de S. thermophilus (DGCC7710, DGCC7710[phi]2972+S4 et DGCC7710[phi]2972+S7) en cours d'infection par le phage 2972. Des travaux ont également été faits sur la replication virale chez les trois souches. Finalement, des essais enzymatiques in vitro ont été réalisés avec deux des quatre protéines Cas dont les gènes précèdent un des loci CRISPR de la souche DGCC7710. Les résultats du projet indiquent, entre autres, que les quatre gènes cas présents chez la souche S. thermophilus DGCC7710 sont transcrits constitutivement et que l'ARNm viral est dégradé par les souches résistantes ayant acquis de nouveaux spacers, ce qui ne semble pas être observé au niveau de l'ADN. Les résultats des essais enzymatiques démontrent également que les protéines Casl et Cas2 possèdent une activité sbRNase, qui dans le cas de la protéine Casl, est spécifique à la séquence A(U)C. Les résultats démontrent que le système CRISPR-cas agit de façon à dégrader l'ARN étranger comprenant une séquence identique à un spacer acquis par une souche résistante, ce qui a pour effet direct de limiter la replication du phage. 2009 info:eu-repo/semantics/openAccess https://corpus.ulaval.ca/jspui/conditions.jsp info:eu-repo/semantics/masterThesis http://hdl.handle.net/20.500.11794/21000 fre xiv, 109 f. application/pdf Université Laval |
collection |
NDLTD |
language |
French |
format |
Dissertation |
sources |
NDLTD |
topic |
Streptococcus salivarius Bactériophages Acides nucléiques -- Séquences répétées |
spellingShingle |
Streptococcus salivarius Bactériophages Acides nucléiques -- Séquences répétées Garneau, Josiane Caractérisation du système CRISPR-cas chez Streptococcus thermophilus |
description |
CRISPR : Clustered regularly interspaced short palindromic repeats === Streptococcus thermophilus est une bactérie utilisée pour la fabrication de produits laitiers fermentes, mais elle doit constamment lutter contre les infections par de nouveaux bacteriophages virulents. Récemment, un tout nouveau mécanisme naturel de défense contre les phages a été découvert chez S. thermophilus. Les CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats) sont des séquences d'ADN contenant plusieurs répétitions entrecoupées de régions appelées spacers qui proviennent d'ADN extrachromosomique. Les loci CRISPR sont habituellement situés à proximité de gènes cas (CRISPR-associated). L'acquisition d'un spacer est directement reliée à une immunité contre le phage duquel provient l'ADN de ce spacer. Au cours de ce projet de maîtrise, le mode de fonctionnement du système CRISPR-cas a été étudié par analyse transcriptionnelle des gènes cas, de régions impliquées dans le locus CRISPRl-cas ainsi que des gènes viraux chez trois souches isogéniques de S. thermophilus (DGCC7710, DGCC7710[phi]2972+S4 et DGCC7710[phi]2972+S7) en cours d'infection par le phage 2972. Des travaux ont également été faits sur la replication virale chez les trois souches. Finalement, des essais enzymatiques in vitro ont été réalisés avec deux des quatre protéines Cas dont les gènes précèdent un des loci CRISPR de la souche DGCC7710. Les résultats du projet indiquent, entre autres, que les quatre gènes cas présents chez la souche S. thermophilus DGCC7710 sont transcrits constitutivement et que l'ARNm viral est dégradé par les souches résistantes ayant acquis de nouveaux spacers, ce qui ne semble pas être observé au niveau de l'ADN. Les résultats des essais enzymatiques démontrent également que les protéines Casl et Cas2 possèdent une activité sbRNase, qui dans le cas de la protéine Casl, est spécifique à la séquence A(U)C. Les résultats démontrent que le système CRISPR-cas agit de façon à dégrader l'ARN étranger comprenant une séquence identique à un spacer acquis par une souche résistante, ce qui a pour effet direct de limiter la replication du phage. |
author2 |
Moineau, Sylvain |
author_facet |
Moineau, Sylvain Garneau, Josiane |
author |
Garneau, Josiane |
author_sort |
Garneau, Josiane |
title |
Caractérisation du système CRISPR-cas chez Streptococcus thermophilus |
title_short |
Caractérisation du système CRISPR-cas chez Streptococcus thermophilus |
title_full |
Caractérisation du système CRISPR-cas chez Streptococcus thermophilus |
title_fullStr |
Caractérisation du système CRISPR-cas chez Streptococcus thermophilus |
title_full_unstemmed |
Caractérisation du système CRISPR-cas chez Streptococcus thermophilus |
title_sort |
caractérisation du système crispr-cas chez streptococcus thermophilus |
publisher |
Université Laval |
publishDate |
2009 |
url |
http://hdl.handle.net/20.500.11794/21000 |
work_keys_str_mv |
AT garneaujosiane caracterisationdusystemecrisprcaschezstreptococcusthermophilus AT garneaujosiane caracterisationdusystemeclusteredregularlyinterspacedshortpalindromicrepeatscaschezstreptococcusthermophilus |
_version_ |
1719332286967578624 |