Rapid method for the detection of vibrio parahaemolyticus in shellfish in Taiwan

• Main Authors: CHEN,LU-HONG, 陳陸宏
• Other Authors: SU,YUAN-ZHI
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1991
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/62604551499448907273

博士 === 國立臺灣大學 === 農業化學研究所 === 79 === Vibrio parahaemolyticus(腸炎弧菌) 是嗜鹽性微弧狀桿菌，常在海鮮食品中檢出， 是國內常見之食物中毒病原菌。 為尋求快速檢驗方法，本研究由七段低聚核 酸中，以收集之95株V.parahaemolyti- cus 為檢測對象，其中自臨床檢體分離的有31株，自食品分離的有64株，篩選到一段 具有26個鹼基之5''-GCT-AAC-TTT-GTT-GGT-GAA-GAT-GAA-GG-3''序列，經 P 標識後作 為探針 (稱為probe 5)，以菌落雜交之方法，可檢測V.parahaemolyticus。 本研究同時比較細菌自動鑑定儀 Vitek Jr.迷你化細菌鑑定套組Microbact 24E 和EL ISA 之方法，以ELISA 之檢測率99％最高，其他依次為Microbact 24E 之96％，pro- be 5 之94％，Vitek 之80％。以非V.parahaemolyticus 測試時，ELISA 之假陽性比 率高達60％，而probe 5 則具特異性，可用以檢測V.parahaemolyticus。 將V.parahaemolyticus及其他菌株同時加入食品牡蠣中，經適當衡釋後塗抹在TSA-3% NaCl上，待菌落長出後，不須分離純化；即可利用此段探針進行V.parahaemolyticus 之檢測。利用本方法可將傳統上檢測V.parahaemolyticus所需之5-6 天減少到3-4 天 。本方法之靈敏度為10 -10 菌體。 將95株V.parahaemolyticus之 DNA抽出，經限制 HindIII 切割，電泳分離，南氏轉 印，然後以probe 5 進行雜交反應，發現31株分離自臨床檢體之菌株中，有29株 (94 ％) 具有三段HindIII DNA fragments 能與probe 5 雜交，其大小約為2.8，1.1與 0 .5kb。64株由食品檢體分離之菌株中，有56株(88％)具有一段0.5 kb之HindIII DNA fragment，5 株(8%)之HindIII DNA fragment不會與probe 5 雜交。