Studies on the repetitive sequences of holstein cattle genomic DNA

• Main Authors: CHEN, QING=REN, 陳慶任
• Other Authors: HUANG, MU-QIU
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1992
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/78021743576368953355

碩士 === 國立中興大學 === 畜牧研究所 === 80 === DNA 重複序列遍存於真核生物基因組中，已有研究者以重複序列DNA 為探針，應用 於DNA 指紋分析。本研究之目的在於探討乳牛基因組DNA 重複序列之性質，並探討 其應用於DNA 指紋法分析之可行性。同時也以商品化之人33.15 探針與荷蘭牛、豬 、雞及小鼠之基因組DNA 雜交，進行DNA 指紋分析，供對照之用。 試驗分三部分進行。第一部分，取荷蘭牛基因組DNA ，以Pst Ⅰ切割，經膠體電泳 後，在膠片上形成７條明顯的DNA環帶，並回收其第６條環帶(0.7kb) DNA，架構入 pUC18 內，利用X-gal 及碎裂法快速偵測出重組質體，然後進行DNA 序列分析，再 將之與限制切割之荷蘭牛、豬、雞及小鼠之基因組DNA 進行初步雜交試驗，以探 討其重複序列及其應用於DNA 指紋法分析之可行性。第二部分，取本研究室篩選到 並已接在pUC18 內之牛、豬、雞及小鼠之基因組DNA 片段進行初步雜交試驗，若有 多態性產生，則再進一步分析其DNA 重複序列及其應用於DNA 指紋法分析之可行性 。本試驗也應用人33.15 探針，與經限制切割、電泳及轉漬之荷蘭牛、豬、雞及 小鼠之基因組DNA 雜交，進行DNA 指紋分析法，並將牛α s1-酪蛋白基因之DNA 片 段與之作點雜交，以探討牛α s1-酪蛋白基因之DNA 片段是否與人33.15 探針具有 同源性關係。 試驗結果顯示，牛基因組DNA經PstⅠ處理，回收之第６條環帶之重組質體DNA 探針 ，與經不同濃度之PstⅠ限制切割之荷蘭牛基因組DNA雜交，在X-光片上呈現不同 濃度之梯狀分佈之雜交環帶，顯示該部分之DNA 是由聚合態(polymer) 分解成單一 態(monomer) ，且散佈在基因組中。經分析其DNA 序列，發現其為A+T-rich且其重 複序列大都屬於短核酸序列形態存在。在牛αs1-酪蛋白DNA重複序列之研究中， 發現5'端之0.9 kb之DNA 片段序列中，有４段重複序列，每段長為74-103 bp ，其 氮鹼基組成G+C 佔大部分。利用人33.15 探針與荷蘭牛、豬、雞及小鼠等經限制 切割後之基因組DNA 雜交，結果，發現部份有多態性出現。以人33.15 探針與牛α s1-酪蛋白基因17個分殖DNA片段雜交的結果，發現其中有６個極強之訊息，顯示其 中部份序列與人33.15 探針DNA 序列具有一致之相似性。