Aerononas hydrophila -澱粉基因之分子選殖及在大腸桿菌之表現及pseudomonas putida肌酸基因在大腸桿菌的表現
碩士 === 國立成功大學 === 生物化學研究所 === 80 === Aeromonas hydrophila是一株具有良好菌體外分泌能力的革蘭氏陰性菌,能分泌多種 發白質到菌體外。因此,利用基因重組的技術將外分泌性蛋白質α- 澱粉梅基因選殖 出來,然後分析其核甘酸序列及其在大腸桿菌中的表現情形,以期對於革蘭氏陰性菌 的蛋白質分泌機制及大腸桿菌分泌載體的開發能有進一步的研究。 自完整的A. hydrophila...
Main Authors: | , |
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Other Authors: | |
Format: | Others |
Language: | zh-TW |
Published: |
1992
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Online Access: | http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/51966711750887361104 |
Summary: | 碩士 === 國立成功大學 === 生物化學研究所 === 80 === Aeromonas hydrophila是一株具有良好菌體外分泌能力的革蘭氏陰性菌,能分泌多種
發白質到菌體外。因此,利用基因重組的技術將外分泌性蛋白質α- 澱粉梅基因選殖
出來,然後分析其核甘酸序列及其在大腸桿菌中的表現情形,以期對於革蘭氏陰性菌
的蛋白質分泌機制及大腸桿菌分泌載體的開發能有進一步的研究。
自完整的A. hydrophila 基因庫中選殖到了含α- 澱粉梅基因的DNA 片段,經次選殖
後的長度約1.66kd。唯一可能的開放閱讀架可解釋出443 個胺基酸,分子量約
48.29kd ,此胺基酸序列具有N 端訊息胜肱,並具有一般α- 澱粉梅四個高度保留序
列中的三個,而且也與Streptomyces、Drosophila及rat 等哺乳動物的序列具高
homology。因此,推測α- 澱粉梅的作用可能有一共通的模式,且與Streptomyces等
α- 澱粉梅是源自相同或相近的演化起源。大腸桿菌可主動地分泌一部份的α- 澱粉
梅到菌體外,其分泌途徑須經過膜間隙,但能突破外膜障礙的α- 澱粉梅相當有限。
故推測所選殖的α- 澱粉梅基因可能含有影響蛋白質分泌的訊息能被宿主大腸桿菌所
認知,但可能另外還須其它外在因子的參與,而大腸桿菌或所選殖的基因可能久缺其
中的某些因子。另外,1asZ啟動子可增強α- 澱粉梅基因在大腸桿菌中的表現。
肌酸梅可應用於臨床上定量血清及尿液中肌酸酐的濃度,此酵素的基因已從
P. putidaha的基因庫中選殖出來,可利用大腸桿菌生產此梅,而且不須要肌酸酐或
肌酸的誘導,這個發現非常有助於酵素分析系統的開發。利用Minicell System的方
法及SDS-PAGE的分析,鑑定出肌酸梅的分子量約49000 dalton 左右,而此基因的
DNA 序列解讀工作尚在進行當中,有部份的DNA 序列已被定出。
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