Aerononas hydrophila -澱粉基因之分子選殖及在大腸桿菌之表現及pseudomonas putida肌酸基因在大腸桿菌的表現

• Main Authors: ZHANG, JING-QI, 張靜琦
• Other Authors: ZHANG, MIN-ZHENG
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1992
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/51966711750887361104

碩士 === 國立成功大學 === 生物化學研究所 === 80 === Aeromonas hydrophila是一株具有良好菌體外分泌能力的革蘭氏陰性菌，能分泌多種 發白質到菌體外。因此，利用基因重組的技術將外分泌性蛋白質α- 澱粉梅基因選殖 出來，然後分析其核甘酸序列及其在大腸桿菌中的表現情形，以期對於革蘭氏陰性菌 的蛋白質分泌機制及大腸桿菌分泌載體的開發能有進一步的研究。 自完整的A. hydrophila 基因庫中選殖到了含α- 澱粉梅基因的DNA 片段，經次選殖 後的長度約1.66kd。唯一可能的開放閱讀架可解釋出443 個胺基酸，分子量約 48.29kd ，此胺基酸序列具有N 端訊息胜肱，並具有一般α- 澱粉梅四個高度保留序 列中的三個，而且也與Streptomyces、Drosophila及rat 等哺乳動物的序列具高 homology。因此，推測α- 澱粉梅的作用可能有一共通的模式，且與Streptomyces等 α- 澱粉梅是源自相同或相近的演化起源。大腸桿菌可主動地分泌一部份的α- 澱粉 梅到菌體外，其分泌途徑須經過膜間隙，但能突破外膜障礙的α- 澱粉梅相當有限。 故推測所選殖的α- 澱粉梅基因可能含有影響蛋白質分泌的訊息能被宿主大腸桿菌所 認知，但可能另外還須其它外在因子的參與，而大腸桿菌或所選殖的基因可能久缺其 中的某些因子。另外，1asZ啟動子可增強α- 澱粉梅基因在大腸桿菌中的表現。 肌酸梅可應用於臨床上定量血清及尿液中肌酸酐的濃度，此酵素的基因已從 P. putidaha的基因庫中選殖出來，可利用大腸桿菌生產此梅，而且不須要肌酸酐或 肌酸的誘導，這個發現非常有助於酵素分析系統的開發。利用Minicell System的方 法及SDS-PAGE的分析，鑑定出肌酸梅的分子量約49000 dalton 左右，而此基因的 DNA 序列解讀工作尚在進行當中，有部份的DNA 序列已被定出。