Cell cycle phase-dependent cytotoxicity of actinomycin D in HeLa cells
碩士 === 國立陽明大學 === 藥理學研究所 === 80 === Actinomycin D(Act-D)是一種治療癌症的化學療劑,它兼具有DNA intercalator、 RNA 和成抑制劑及topoisomerase (TOPO)抑制劑多項作用,有很強烈的細胞毒性。本 論文以HeLa細胞給予act-D 處理30分鐘後,移除Act-D ,即短暫處理(short exposure) 作為實驗模型,探討在不同情況下那些細胞經Act-D 短暫...
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Language: | zh-TW |
Published: |
1992
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Online Access: | http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/87222083351548920855 |
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ndltd-TW-080YM002550009 |
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ndltd-TW-080YM0025500092016-07-25T04:07:02Z http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/87222083351548920855 Cell cycle phase-dependent cytotoxicity of actinomycin D in HeLa cells 放射菌素D對於不同細胞週期的HeLa細胞其細胞毒性效應之研究 WU, MING-XIU 吳明修 碩士 國立陽明大學 藥理學研究所 80 Actinomycin D(Act-D)是一種治療癌症的化學療劑,它兼具有DNA intercalator、 RNA 和成抑制劑及topoisomerase (TOPO)抑制劑多項作用,有很強烈的細胞毒性。本 論文以HeLa細胞給予act-D 處理30分鐘後,移除Act-D ,即短暫處理(short exposure) 作為實驗模型,探討在不同情況下那些細胞經Act-D 短暫處理後即死亡, 那些仍能存活:(1 )高劑量Act-D (1000ng/ml)短暫處理後24小時,增加S 及 GM+M phase 細胞比例,48小時則發生S phase 細胞比例減少;低劑量Act-D (100ng/ml)短暫處理後對細胞週期分布無明顯影響。高、低劑量Act-D 都能造成細胞 死亡,卻對細胞週期影響不同。(2 )細胞生長同步化(synchronization) 的情況下, 在不同細胞週期給予低劑量Act-D 短暫處理後,發現從G1到S phase 0-72小時的生長 曲線會出現細胞數目先增加而後減少的現象。以colcny formation assay發現Act-D 的細胞毒性可能藉由TOPO的抑制作用造成DNA 斷裂而使細胞死亡,本論文由藥物的交 互作用來證明Act-D 是TOPO II inhibitor:(a)TOPO I抑制劑--camptothecin可被 aphidicolin 降低或完全消除其細胞毒性,但卻不能影響Act-D 的細胞毒性。(b )典 型的TOPO II 抑制劑,如m-AMSM的細胞毒性可被novobiocin降低甚至消除, novobiocin可以消除低劑量Act-D 引起的細胞毒性,故Act-D 應屬於TOPO II 抑制劑 。(4 )先以12-0-tetrade anoyl phorbol 3 acetate(TPA) 刺激protein kinase C活 性後再給予Act-D ,會加強Act-D 的細胞毒性。(5 )TOPO II 抑制劑對生長迅速的細 胞會具有較大的細胞毒性,對於緩慢生長的細胞毒性較低。將Hela細胞培養在無血清 培養液中,使之生長緩慢,24小時後更換含有血清的培養液使細胞生長迅速,在給予 含有血清培養液刺激12-15小時會出現對Act-D 很敏感的時期,Act-D 經短暫處理後 細胞數一直無法增加,由colony formation assay發現約有70% 細胞死亡,但對細胞 週期分布卻無明顯影響。另外,在血清刺激後第24小時經Act-D 短暫處理卻出現對 Act-D 不敏感的時期,以immunoblot測TOPO II 的量,發現血清刺激生長後TOPO II 的量變化不大,對Act-D 很敏感及不敏感的反應並非來自TOPO II 量增減所造成。 WENG, YI-MING 翁一鳴 1992 學位論文 ; thesis 73 zh-TW |
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碩士 === 國立陽明大學 === 藥理學研究所 === 80 === Actinomycin D(Act-D)是一種治療癌症的化學療劑,它兼具有DNA intercalator、
RNA 和成抑制劑及topoisomerase (TOPO)抑制劑多項作用,有很強烈的細胞毒性。本
論文以HeLa細胞給予act-D 處理30分鐘後,移除Act-D ,即短暫處理(short
exposure) 作為實驗模型,探討在不同情況下那些細胞經Act-D 短暫處理後即死亡,
那些仍能存活:(1 )高劑量Act-D (1000ng/ml)短暫處理後24小時,增加S 及
GM+M phase 細胞比例,48小時則發生S phase 細胞比例減少;低劑量Act-D
(100ng/ml)短暫處理後對細胞週期分布無明顯影響。高、低劑量Act-D 都能造成細胞
死亡,卻對細胞週期影響不同。(2 )細胞生長同步化(synchronization) 的情況下,
在不同細胞週期給予低劑量Act-D 短暫處理後,發現從G1到S phase 0-72小時的生長
曲線會出現細胞數目先增加而後減少的現象。以colcny formation assay發現Act-D
的細胞毒性可能藉由TOPO的抑制作用造成DNA 斷裂而使細胞死亡,本論文由藥物的交
互作用來證明Act-D 是TOPO II inhibitor:(a)TOPO I抑制劑--camptothecin可被
aphidicolin 降低或完全消除其細胞毒性,但卻不能影響Act-D 的細胞毒性。(b )典
型的TOPO II 抑制劑,如m-AMSM的細胞毒性可被novobiocin降低甚至消除,
novobiocin可以消除低劑量Act-D 引起的細胞毒性,故Act-D 應屬於TOPO II 抑制劑
。(4 )先以12-0-tetrade anoyl phorbol 3 acetate(TPA) 刺激protein kinase C活
性後再給予Act-D ,會加強Act-D 的細胞毒性。(5 )TOPO II 抑制劑對生長迅速的細
胞會具有較大的細胞毒性,對於緩慢生長的細胞毒性較低。將Hela細胞培養在無血清
培養液中,使之生長緩慢,24小時後更換含有血清的培養液使細胞生長迅速,在給予
含有血清培養液刺激12-15小時會出現對Act-D 很敏感的時期,Act-D 經短暫處理後
細胞數一直無法增加,由colony formation assay發現約有70% 細胞死亡,但對細胞
週期分布卻無明顯影響。另外,在血清刺激後第24小時經Act-D 短暫處理卻出現對
Act-D 不敏感的時期,以immunoblot測TOPO II 的量,發現血清刺激生長後TOPO II
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