PREPARATION AND CHARACTERIZATION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO THE FIFTH-STAGE WORMS OF DIROFI- LARIA immitis

• Main Authors: Ying-Shain Chen, 陳盈憲
• Other Authors: Chuan-Min Yen
• Format: Others
• Language: zh-TW
• Published: 1995
• Online Access: http://ndltd.ncl.edu.tw/handle/59386387646731570582

碩士 === 高雄醫學院 === 醫學研究所 === 83 === BALB ／ C 小白鼠經初次注射犬心絲蟲第五期蟲體抗原及追加注射免疫後 ，將其脾臟細胞和 NS-1 骨髓瘤細胞以 10：1 比例混合， 以 PEG-1500 促使細胞融合後，以含 aminopterin，hypoxanthine 和 thymidine 的完 全組織培養液稀釋細胞並分注入 96 孔洞組織培養盤篩選並培養融合瘤細 胞。培養盤各孔洞的上清液用犬心絲蟲第五期蟲體粗製抗原以酵素標幟免 疫吸附法篩選會分泌抗體的融合瘤，而分泌抗體的融合瘤細胞以單一細胞 培養法來取得單株抗體。20 株分泌抗體中最高值的 5 株融合瘤經使用犬 蛔蟲、豬蛔蟲、中華肝吸蟲、廣東住血線蟲、孢殖芽蟲、 海獸胃線蟲抗 原來篩選交叉反應性， 這 5 株命名為 Di-3 ，Di-4，Di-5，Di-6及 Di-8 的單株抗體對犬心絲蟲第五期蟲體抗原均有專一性，而所分泌的抗 體都是免疫球蛋白Ａ。單株抗體和抗原間的親和常數（ Ka ）依據質量作 用定律計算出 Di-3，Di-4，Di-5， Di-6和Di-8 的 Ka值分別為 1.43 × 10^8，2.29 × 10^8， 3.08 × 10^8，9.52 × 10^8和2.54 × 10^11。 犬心絲蟲第五期蟲體抗原於還原情況下跑電泳後，此五株單株抗 體以西方轉漬分析均認知 120、105、51及 35kDa 分子量上的抗原決定區 。五株單株抗體經由加成試驗評估認知蟲體抗原上的抗原決定區是否相同 ， 由 Di-3 和 Di-4，Di-3 和 Di-5， Di-3 和 Di-6，Di-3 和 Di-8， Di-4 和 Di-5， Di-4 和 Di-6， Di-4 和 Di-8， Di-5 和 Di-6，Di-5 和 Di-8， Di-6 和 Di-8 間產生的加成性分別為≒ 0 ％， ≒ 0 ％， ≒ 0 ％， 14.4 ％， ≒ 0 ％， 3.8 ％，13.2 ％， 1.3 ％，16.1 ％ ，19.8 ％。此五株單株抗體將在後繼研究經由免疫親和管柱來純化對應 的抗原而作專一性免疫診斷或以製備的單株抗體以雙抗體三明治式的酵素 標幟免疫吸附法來偵測檢體中犬心絲蟲循環抗原而達到免疫診斷的試。