Efecto de la suplementación de suero fetal bovino y ácido ascórbico sobre la diferenciación osteogénica de células madre mesenquimales (CMM) bovinas
Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario === El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de distintas concentraciones de Suero Fetal Bovino (SFB) y Ácido Ascórbico (AA) sobre la diferenciación osteogénica de Células Madre Mesenquimales (CMM) bovinas. Las CMM fue...
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Universidad de Chile
2015
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ndltd-UCHILE-oai-repositorio.uchile.cl-2250-1315442017-02-06T05:19:43Z Efecto de la suplementación de suero fetal bovino y ácido ascórbico sobre la diferenciación osteogénica de células madre mesenquimales (CMM) bovinas Cortés Araya, Yennifer Alejandra Peralta Troncoso, Oscar Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias Departamento de Fomento de la Producción Animal Reyes Solovera, Mónica de los Fernández Garay, María Soledad Ganado vacuno Células madre fetales Células madre mesenquimales Osteocalcina Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de distintas concentraciones de Suero Fetal Bovino (SFB) y Ácido Ascórbico (AA) sobre la diferenciación osteogénica de Células Madre Mesenquimales (CMM) bovinas. Las CMM fueron aisladas desde médula ósea de fetos bovinos, mediante adherencia al plástico y posteriormente cultivadas en los distintos tratamientos. El medio DMEM fue suplementado con dexametasona (100 nM), β-glicerofosfato (10 mM), más concentraciones variables de AA y SFB; 0 mM AA - 0% SFB (T1); 0,1 mM AA - 10% SFB (T2); 0,01 mM AA - 10% SFB (T3); 0,001 mM AA - 10% SFB (T4); 0,1 mM AA - 5% SFB (T5); 0,1 mM AA - 2% SFB (T6). La diferenciación fue analizada al día 21 de cultivo mediante cuantificación de la expresión de los genes osteo-específico Osteocalcina (OCN), pluripotencia (NANOG) y del control endógeno gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) utilizando PCR cuantitativo. La actividad de Fosfatasa Alcalina (FA) fue cuantificada mediante espectrofotometría. El depósito de minerales fue evaluado mediante tinción Von Kossa. En T2 se expresaron los mayores (P<0,05) niveles de ARNm de OCN (33,7 veces la expresión del T1). Los niveles de ARNm de NANOG disminuyeron (P<0,05) en todos los tratamientos suplementados con AA y SFB. La actividad de FA aumentó en CMM suplementadas con SFB y AA a excepción de T4. Se observó una alta intensidad en la tinción Von Kossa en T2. En conclusión, el SFB participa parcialmente en la diferenciación osteogénica, mientras que la suplementación de una alta concentración de AA aumenta la capacidad de diferenciación de las CMM bovinas hacia el linaje osteogénico Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 11100205 2015-06-30T20:17:56Z 2015-06-30T20:17:56Z 2013 Tesis http://repositorio.uchile.cl/handle/2250/131544 es Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 Chile http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/cl/ Universidad de Chile |
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Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario === El objetivo del presente estudio fue determinar el efecto de distintas concentraciones de Suero
Fetal Bovino (SFB) y Ácido Ascórbico (AA) sobre la diferenciación osteogénica de Células Madre
Mesenquimales (CMM) bovinas. Las CMM fueron aisladas desde médula ósea de fetos bovinos,
mediante adherencia al plástico y posteriormente cultivadas en los distintos tratamientos. El medio
DMEM fue suplementado con dexametasona (100 nM), β-glicerofosfato (10 mM), más
concentraciones variables de AA y SFB; 0 mM AA - 0% SFB (T1); 0,1 mM AA - 10% SFB (T2);
0,01 mM AA - 10% SFB (T3); 0,001 mM AA - 10% SFB (T4); 0,1 mM AA - 5% SFB (T5); 0,1 mM
AA - 2% SFB (T6). La diferenciación fue analizada al día 21 de cultivo mediante cuantificación de
la expresión de los genes osteo-específico Osteocalcina (OCN), pluripotencia (NANOG) y del
control endógeno gliceraldehido-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) utilizando PCR cuantitativo.
La actividad de Fosfatasa Alcalina (FA) fue cuantificada mediante espectrofotometría. El depósito
de minerales fue evaluado mediante tinción Von Kossa. En T2 se expresaron los mayores
(P<0,05) niveles de ARNm de OCN (33,7 veces la expresión del T1). Los niveles de ARNm de
NANOG disminuyeron (P<0,05) en todos los tratamientos suplementados con AA y SFB. La
actividad de FA aumentó en CMM suplementadas con SFB y AA a excepción de T4. Se observó
una alta intensidad en la tinción Von Kossa en T2. En conclusión, el SFB participa parcialmente en
la diferenciación osteogénica, mientras que la suplementación de una alta concentración de AA
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