Régulation de la voie alterne du complément par le facteur H : élucidation de son assemblage avec C3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse
La formation du complexe C3b-H est essentielle au bon fonctionnement de la voie alterne du système du complément puisqu’elle permet d’inhiber la formation du complexe d’attaque membranaire à la surface de nos cellules, préservant l’organisme de toute destruction auto-immune. L’interaction de H avec...
Main Author: | |
---|---|
Other Authors: | |
Language: | fr |
Published: |
2010
|
Subjects: | |
Online Access: | http://www.theses.fr/2010EVRY0006 |
id |
ndltd-theses.fr-2010EVRY0006 |
---|---|
record_format |
oai_dc |
spelling |
ndltd-theses.fr-2010EVRY00062019-04-17T05:08:45Z Régulation de la voie alterne du complément par le facteur H : élucidation de son assemblage avec C3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse Complement alternative pathway regulation by factor H : proposal of a C3b-H complex by using oxidative footprinting and crosslinking coupled with mass spectrometry Marquage oxydatif Oxydative footprinting La formation du complexe C3b-H est essentielle au bon fonctionnement de la voie alterne du système du complément puisqu’elle permet d’inhiber la formation du complexe d’attaque membranaire à la surface de nos cellules, préservant l’organisme de toute destruction auto-immune. L’interaction de H avec C3b permet notamment de favoriser l’inactivation protéolytique de C3b par le facteur I, bloquant de ce fait l’activation de la voie alterne. Malgré l’importance du complexe C3b-H, l’interaction entre ces deux protéines à l’échelle moléculaire reste méconnue. En effet, à l’heure actuelle, aucune structure tridimensionnelle de ce complexe n’a pu être obtenue, que ce soit par cristallographie ou par résonance magnétique nucléaire, en raison de sa taille (335 kg.mol-1) et de la flexibilité de H. Cependant, la connaissance de l’organisation de ce complexe est nécessaire à la compréhension de la régulation de la voie alterne et pourrait de plus, se révéler utile quant au développement de thérapies vis-à-vis des maladies auto-immunes tel que le syndrome hémolytique et urémique atypique. Au cours de ces travaux, nous nous sommes donc intéressés à l’étude du complexe C3b-H à l’échelle de l’édifice entier par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse. Ces approches expérimentales nous ont ainsi permis de proposer, à l’échelle de la molécule entière, un modèle tridimensionnel de ce complexe de haut poids moléculaire. The C3b-H complex plays an essential role in regulation of the complement alternative pathway (AP) because it blocks the attack membrane complex (MAC) formation on our self-surface, thus preserving host from autoimmune disease. The C3b-H interaction leads to the proteolytic inactivation of C3b induced by factor I, thus blocking the MAC formation and consequently AP activation. Despite this importance of C3b-H complex for the innate immunity, the mechanism of interaction between these two molecules at the molecular level remains to be established. Indeed, up to date, no three-dimensional structure of this complex is available, either by X-ray crystallography or nuclear magnetic resonance, due to its large size (335 kg.mol-1) and flexibility of H. Yet, these data are required for a better understanding of AP regulation and, might moreover, be useful for the implementation of therapy against autoimmune disorders. In this study, we investigate the C3b-H complex by using oxidative footprinting and cross-linking coupled with mass spectrometry. Our experimental approaches have been successfully applied, allowing us to propose a three-dimensional model of this high molecular complex. Electronic Thesis or Dissertation Text Image StillImage fr http://www.theses.fr/2010EVRY0006 Le Mignon, Maxime 2010-05-07 Evry-Val d'Essonne Gonnet, Florence Régis, Daniel |
collection |
NDLTD |
language |
fr |
sources |
NDLTD |
topic |
Marquage oxydatif Oxydative footprinting |
spellingShingle |
Marquage oxydatif Oxydative footprinting Le Mignon, Maxime Régulation de la voie alterne du complément par le facteur H : élucidation de son assemblage avec C3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse |
description |
La formation du complexe C3b-H est essentielle au bon fonctionnement de la voie alterne du système du complément puisqu’elle permet d’inhiber la formation du complexe d’attaque membranaire à la surface de nos cellules, préservant l’organisme de toute destruction auto-immune. L’interaction de H avec C3b permet notamment de favoriser l’inactivation protéolytique de C3b par le facteur I, bloquant de ce fait l’activation de la voie alterne. Malgré l’importance du complexe C3b-H, l’interaction entre ces deux protéines à l’échelle moléculaire reste méconnue. En effet, à l’heure actuelle, aucune structure tridimensionnelle de ce complexe n’a pu être obtenue, que ce soit par cristallographie ou par résonance magnétique nucléaire, en raison de sa taille (335 kg.mol-1) et de la flexibilité de H. Cependant, la connaissance de l’organisation de ce complexe est nécessaire à la compréhension de la régulation de la voie alterne et pourrait de plus, se révéler utile quant au développement de thérapies vis-à-vis des maladies auto-immunes tel que le syndrome hémolytique et urémique atypique. Au cours de ces travaux, nous nous sommes donc intéressés à l’étude du complexe C3b-H à l’échelle de l’édifice entier par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse. Ces approches expérimentales nous ont ainsi permis de proposer, à l’échelle de la molécule entière, un modèle tridimensionnel de ce complexe de haut poids moléculaire. === The C3b-H complex plays an essential role in regulation of the complement alternative pathway (AP) because it blocks the attack membrane complex (MAC) formation on our self-surface, thus preserving host from autoimmune disease. The C3b-H interaction leads to the proteolytic inactivation of C3b induced by factor I, thus blocking the MAC formation and consequently AP activation. Despite this importance of C3b-H complex for the innate immunity, the mechanism of interaction between these two molecules at the molecular level remains to be established. Indeed, up to date, no three-dimensional structure of this complex is available, either by X-ray crystallography or nuclear magnetic resonance, due to its large size (335 kg.mol-1) and flexibility of H. Yet, these data are required for a better understanding of AP regulation and, might moreover, be useful for the implementation of therapy against autoimmune disorders. In this study, we investigate the C3b-H complex by using oxidative footprinting and cross-linking coupled with mass spectrometry. Our experimental approaches have been successfully applied, allowing us to propose a three-dimensional model of this high molecular complex. |
author2 |
Evry-Val d'Essonne |
author_facet |
Evry-Val d'Essonne Le Mignon, Maxime |
author |
Le Mignon, Maxime |
author_sort |
Le Mignon, Maxime |
title |
Régulation de la voie alterne du complément par le facteur H : élucidation de son assemblage avec C3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse |
title_short |
Régulation de la voie alterne du complément par le facteur H : élucidation de son assemblage avec C3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse |
title_full |
Régulation de la voie alterne du complément par le facteur H : élucidation de son assemblage avec C3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse |
title_fullStr |
Régulation de la voie alterne du complément par le facteur H : élucidation de son assemblage avec C3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse |
title_full_unstemmed |
Régulation de la voie alterne du complément par le facteur H : élucidation de son assemblage avec C3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse |
title_sort |
régulation de la voie alterne du complément par le facteur h : élucidation de son assemblage avec c3b par marquage oxydatif et pontage chimique couplés à la spectrométrie de masse |
publishDate |
2010 |
url |
http://www.theses.fr/2010EVRY0006 |
work_keys_str_mv |
AT lemignonmaxime regulationdelavoiealterneducomplementparlefacteurhelucidationdesonassemblageavecc3bparmarquageoxydatifetpontagechimiquecouplesalaspectrometriedemasse AT lemignonmaxime complementalternativepathwayregulationbyfactorhproposalofac3bhcomplexbyusingoxidativefootprintingandcrosslinkingcoupledwithmassspectrometry |
_version_ |
1719018567838466048 |