Mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de CENP-A aux centromeres
La ségrégation fidèle des chromosomes est dirigée par le centromère, un locus chromosomique spécialisé qui est requis pour l’assemblage des kinetochores actifs. Les centromères sont marqués épigénétiquement par la présence d’un nucléosome unique qui contient un variant centromérique de l’histone H3...
Main Author: | |
---|---|
Other Authors: | |
Language: | en |
Published: |
2012
|
Subjects: | |
Online Access: | http://www.theses.fr/2012STRAJ028/document |
id |
ndltd-theses.fr-2012STRAJ028 |
---|---|
record_format |
oai_dc |
spelling |
ndltd-theses.fr-2012STRAJ0282018-08-24T04:29:34Z Mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de CENP-A aux centromeres Epigenetic mechanism of CENP-A loading to centromeres Histone variant CENP-A Centromères Histone chaperone HJURP Histone variant CENP-A Centromeres Histone chaperone HJURP 572.8 La ségrégation fidèle des chromosomes est dirigée par le centromère, un locus chromosomique spécialisé qui est requis pour l’assemblage des kinetochores actifs. Les centromères sont marqués épigénétiquement par la présence d’un nucléosome unique qui contient un variant centromérique de l’histone H3 appelé Centromere protein A (CENP-A). Une question fondamentale est comment CENP-A est spécifiquement déposé aux centromères. L’objectif de ma thèse a été d’identifier les facteurs spécifiques de la déposition de CENP-A. Pour identifier les facteurs spécifiques impliqués dans la déposition de CENP-A aux centromères, j’ai utilisé la méthode de purification TAP-TAG à partir d’une fraction nucléaire soluble de cellules HeLa exprimant stablement une copie ectopique de CENP-A (e-CENP-A). J’ai ainsi pu identifié la protéine Holliday Junction Recognition protein (HJURP). En utilisant un siRNA spécifique de HJURP, j’ai montré que la localisation et la déposition de CENP-A étaient fortement affectées. La protéine recombinante HJURP lie de manière stoechiométrique le tétramère CENP-A/H4 mais il ne lie pas le tétramère H3/H4. La liaison se fait grâce à un petit domaine conservé en position N-terminal de HJURP, dénommé CBD (CENP-A binding domain). De plus, j’ai pu mettre en évidence in vitro que HJURP facilitait la déposition du tétramère CENP-A/H4 sur de l’ADN satellite. L’ensemble de mes résultats démontre très clairement que HJURP est la principale chaperone responsable de la déposition de CENP-A aux centromères. Centromere is a specialized chromosomal locus, where kinetochore assembles, which is required for correct chromosome segregation during cell division. In higher eukaryotes, centromere specification is independent of the DNA sequence and is determined epigenetically by the presence of a unique nucleosome that contains a histone H3 variant, called CENP-A. A fundamental question in centromere biology is that how CENP-A is specifically delivered to and maintained on centromeres. The aim of my thesis was to identify specific chaperone in human, responsible for CENP-A loading to centromeres, by using biochemical and proteomic strategies. To identify CENP-A deposition machinery, I purified the prenucleosomal CENP-A complex from HeLa cells stably expressing epitope tagged CENP-A. By mass spectrometry analysis of proteins present in CENP-A and H3.1 complex, I found HJURP uniquely in CENP-A prenucleosomal complex. Down regulation of HJURP by specific siRNA strongly diminished centromeric localization of CENP-A. Bacteriallyexpressed HJURP specifically binds to the CATD domain of CENP-A, via a highly conserved Nterminal domain, called CBD. Finally, I showed that HJURP is able to facilitate the efficient deposition of CENP-A/H4 tetramer on naked DNA. Taken together, my data demonstrate that HJURP is a key chaperone responsible for the targeting and deposition of newly synthesized CENPA at centromeres. Electronic Thesis or Dissertation Text en http://www.theses.fr/2012STRAJ028/document Shuaib, Muhammad 2012-06-08 Strasbourg Hamiche, Ali |
collection |
NDLTD |
language |
en |
sources |
NDLTD |
topic |
Histone variant CENP-A Centromères Histone chaperone HJURP Histone variant CENP-A Centromeres Histone chaperone HJURP 572.8 |
spellingShingle |
Histone variant CENP-A Centromères Histone chaperone HJURP Histone variant CENP-A Centromeres Histone chaperone HJURP 572.8 Shuaib, Muhammad Mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de CENP-A aux centromeres |
description |
La ségrégation fidèle des chromosomes est dirigée par le centromère, un locus chromosomique spécialisé qui est requis pour l’assemblage des kinetochores actifs. Les centromères sont marqués épigénétiquement par la présence d’un nucléosome unique qui contient un variant centromérique de l’histone H3 appelé Centromere protein A (CENP-A). Une question fondamentale est comment CENP-A est spécifiquement déposé aux centromères. L’objectif de ma thèse a été d’identifier les facteurs spécifiques de la déposition de CENP-A. Pour identifier les facteurs spécifiques impliqués dans la déposition de CENP-A aux centromères, j’ai utilisé la méthode de purification TAP-TAG à partir d’une fraction nucléaire soluble de cellules HeLa exprimant stablement une copie ectopique de CENP-A (e-CENP-A). J’ai ainsi pu identifié la protéine Holliday Junction Recognition protein (HJURP). En utilisant un siRNA spécifique de HJURP, j’ai montré que la localisation et la déposition de CENP-A étaient fortement affectées. La protéine recombinante HJURP lie de manière stoechiométrique le tétramère CENP-A/H4 mais il ne lie pas le tétramère H3/H4. La liaison se fait grâce à un petit domaine conservé en position N-terminal de HJURP, dénommé CBD (CENP-A binding domain). De plus, j’ai pu mettre en évidence in vitro que HJURP facilitait la déposition du tétramère CENP-A/H4 sur de l’ADN satellite. L’ensemble de mes résultats démontre très clairement que HJURP est la principale chaperone responsable de la déposition de CENP-A aux centromères. === Centromere is a specialized chromosomal locus, where kinetochore assembles, which is required for correct chromosome segregation during cell division. In higher eukaryotes, centromere specification is independent of the DNA sequence and is determined epigenetically by the presence of a unique nucleosome that contains a histone H3 variant, called CENP-A. A fundamental question in centromere biology is that how CENP-A is specifically delivered to and maintained on centromeres. The aim of my thesis was to identify specific chaperone in human, responsible for CENP-A loading to centromeres, by using biochemical and proteomic strategies. To identify CENP-A deposition machinery, I purified the prenucleosomal CENP-A complex from HeLa cells stably expressing epitope tagged CENP-A. By mass spectrometry analysis of proteins present in CENP-A and H3.1 complex, I found HJURP uniquely in CENP-A prenucleosomal complex. Down regulation of HJURP by specific siRNA strongly diminished centromeric localization of CENP-A. Bacteriallyexpressed HJURP specifically binds to the CATD domain of CENP-A, via a highly conserved Nterminal domain, called CBD. Finally, I showed that HJURP is able to facilitate the efficient deposition of CENP-A/H4 tetramer on naked DNA. Taken together, my data demonstrate that HJURP is a key chaperone responsible for the targeting and deposition of newly synthesized CENPA at centromeres. |
author2 |
Strasbourg |
author_facet |
Strasbourg Shuaib, Muhammad |
author |
Shuaib, Muhammad |
author_sort |
Shuaib, Muhammad |
title |
Mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de CENP-A aux centromeres |
title_short |
Mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de CENP-A aux centromeres |
title_full |
Mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de CENP-A aux centromeres |
title_fullStr |
Mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de CENP-A aux centromeres |
title_full_unstemmed |
Mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de CENP-A aux centromeres |
title_sort |
mécanisme épigénétique impliqué dans la déposition de cenp-a aux centromeres |
publishDate |
2012 |
url |
http://www.theses.fr/2012STRAJ028/document |
work_keys_str_mv |
AT shuaibmuhammad mecanismeepigenetiqueimpliquedansladepositiondecenpaauxcentromeres AT shuaibmuhammad epigeneticmechanismofcenpaloadingtocentromeres |
_version_ |
1718726792040153088 |