Etude des protéines, MOMP, Omp50 et Cj1169c de Campylobacter

• Main Author: Aliouane, Soumeya
• Other Authors: Aix-Marseille
• Language: fr
• Published: 2016
• Subjects: Campylobacter; Momp; Omp50; Cj1169c; Porines; Périplasme; Porins; Periplasm
• Online Access: http://www.theses.fr/2016AIXM4321

Campylobacter est responsable de la majorité des gastro-entérites bactériennes dans le monde. Sa membrane externe contient des porines qui permettent les échanges entre la bactérie et le milieu extérieur. Elles sont une des voies principales d’entrée pour les antibiotiques et les nutriments. Le premier objectif de mon travail était de participer à la caractérisation des porines MOMP et Omp50. Nous avons purifié ces protéines dans le cadre de collaborations pour l’étude des propriétés biophysiques de ces porines (M. Wintherhalter, Université Jacob, Allemagne) et la détermination de leur structure par cristallisation (J. Naismith, Université St Andrews, Écosse). La deuxième partie de ma thèse a été consacrée à l’étude et la caractérisation du produit du gène Cj1169c qui est en opéron avec le gène codant Omp50. Nous avons cloné et exprimé le gène Cj1169c chez Escherichia coli, ce qui a permis de purifier la protéine et de produire des anticorps spécifiques. Ces anticorps ont été utilisés pour étudier la prévalence de Cj1169c chez les espèces les plus fréquentes. Nous avons montré qu’elle était présente uniquement chez C. jejuni et C. lari et absente chez C. coli. En deuxième lieu, nous avons caractérisé sa production en fonction de conditions de culture et montré qu’elle dépendait du pH et de la température. Nous avons ensuite démontré que cette protéine est située dans le périplasme de Campylobacter. Puis, en raison de la présence de deux résidus de cystéines dans sa séquence, nous avons étudié son comportement en présence et en absence d’agents réducteurs de ponts disulfures. De plus, des résultats préliminaires suggèrent que cette protéine interagit avec Omp50. === Campylobacter is a leading cause of bacterial gastroenteritis worldwide. Its outer membrane contains porins which are pore forming protein that transport hydrophilic compounds like nutrients and antibiotics into the bacteria. My first objective was to purify the two porins MOMP and Omp50 from C. jejuni, in order to allow the study of the biophysical properties of porins (Collaboration with Mr. Wintherhalter, Jacob University, Germany), and to determine the structure of these porins by crystallization (Collaboration with J. Naismith, St Andrews University, Scotland).The second part of my thesis was devoted to the study of the product of the gene Cj1169c which is operonic with the Omp50 coding gene. We cloned and expressed the gene Cj1169c in Escherichia coli, purified the protein and produced Cj1169c-specific antibodies. We studied the prevalence of this protein in the most frequent species of Campylobacter and found the protein only in C. jejuni and C. lari never in C. coli. Then, we also studied the Cj1169c production in the function of several growing conditions, and we found that it depended on the pH and temperature. Besides, we demonstrated by several methods that this protein is located in the periplasmic compartment of the bacteria. Furthermore, because it contains two cysteins residues in its primary sequence, we studied the Cj1169c behavior in the presence and absence of disulfide bond reducing agents. In addition, preliminary results suggest that this protein interacts with Omp50.