Rôle du facteur de transcription TFIIF dans la structure du complexe transcriptionnel de l'ARN polymérase II

• Main Author: Robert, François
• Other Authors: Coulombe, Benoit
• Language: French
• Published: Université de Sherbrooke 1999
• Online Access: http://savoirs.usherbrooke.ca/handle/11143/4990

La transcription par l'ARN polymérase II (ARN pol II) in vitro requiert la présence des facteurs généraux de transcription (FGTs) TBP, TFIIB, TFIIE, TFIIF et TFIIH. Les FGTs s'assemblent sur le promoteur avec l'ARN pol II, permettant ainsi la formation d'un complexe pré-transcriptionnel (PIC). Cet assemblage permet le positionnement du site d'initiation de la transcription du promoteur dans le site actif de la polymérase. Les brins de l'hélice d'ADN seront alors localement déappariés, permettant l'initiation de la transcription. Depuis plusieurs années, un effort considérable a été apporté afin de définir le ou les rôle(s) de chacun des FGTs dans le processus transcriptionnel. Des études de structure par cristallographie aux rayons X et par résonance magnétique nucléaire (RMN) ont permis de mieux comprendre le rôle de certains des FGTs. Cependant, ces technologies ne peuvent être appliquées à de grands complexes tel le complexe transcriptionnel incluant tous les FGTs. Les travaux présentés dans cette thèse s'intéressent à la structure d'un complexe transcriptionnel formé de TBP, TFIIB, TFIIE, TFIIF et l'ARN pol II sur le promoteur majeur tardif de l'adénovirus de type 2, un promoteur modèle pour l'étude de la transcription par l'ARN pol II in vitro . Diverses méthodes incluant une technique de photocrosslinking au 5-[N-( azidobenzoyl)-3-aminoallyl]-dUMP (N₃R-dUMP) ont été utilisées afin de mieux caractériser l'organisation moléculaire de cet important complexe. Nos travaux ont mené à la surprenante découverte que l'ADN est enroulé presqu'un tour complet autour de l'ARN pol II et des FGTs dans le PIC. Cette structure permet de mieux comprendre le rôle de certains FGTs. Le rôle de TFIIF a été étudié en détail par l'utilisation de plusieurs formes mutées de sa sous-unité RAP74. Nous avons démontré que TFIIF, et plus particulièrement RAP74, joue un rôle clé dans la formation de la structure enroulée du PIC. Nos résultats permettent d'expliquer certaines observations obtenues par d'autres laboratoires, à savoir que TFIIF est impliqué dans l'ouverture de l'hélice d'ADN au niveau du site d'initiation de la transcription et dans le choix du site d'initiation. En effet, nous proposons que l'enroulement est une étape essentielle, facilitant la séparation des brins d'ADN au site d'initiation en induisant une superhélicité négative dans l'ADN. Ce modèle est en accord avec des données obtenues avec l'ARN polymérase de Escherichia coli.